Efeitos citotóxicos de endotoxinas em culturas de macrófagos: análise da liberação de metaloproteinases da matriz induzida por LPS de E. coli (in vitro) e análise da liberação de citocinas induzida por LPS

• Processo: 08/55780-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2011
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Antonio Olavo Cardoso Jorge
• Beneficiário: Antonio Olavo Cardoso Jorge
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOSJC). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
• Assunto(s): Canal radicular Endotoxinas Citocinas Macrófagos Metaloproteinases da matriz Interleucinas Reabsorção óssea Ensaio de imunoadsorção enzimática
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citocinas | Elisa | Endotoxinas | Macrofagos | Metaloproteinases Da Matriz | Reabsorcao Ossea Periapical

Resumo

Endotoxinas (LPS) presentes nos canais radiculares infectados estimulam macrófagos a liberar diferentes citocinas, as quais podem modular a subsequente produção de metaloproteinases da matriz (MMP) induzindo reabsorção óssea periapical. Este trabalho será dividido em 2 etapas. A Ia etapa (in vitro) tem como objetivo avaliar a capacidade de diferentes concentrações de endotoxinas induzir a secreção de MMP-1, MMP-3 e MMP-8 em macrófagos humanos, em variados períodos de tempo e verificar o envolvimento de diferentes citocinas neste processo. Os objetivos da 2.ª etapa serão: a) avaliar in vivo as quantidades de endotoxinas em canais radiculares com polpa necrosada, antes da realização do tratamento endodôntico; b) avaliar os efeitos do preparo biomecânico utilizando diferentes associações de agentes irrigantes sobre endotoxinas; c) avaliar a ação da medicação intracanal sobre endotoxinas em canais radiculares; d) avaliar, durante todo o tratamento endodôntico, a produção de citocinas por macrófagos in vitro estimulados pelas amostras coletadas dos canais. Para a 1.ª etapa, macrófagos humanos serão ativados com diferentes concentrações de endotoxinas e a produção de MMP-1, MMP-3 e MMP-8 será avaliada em três períodos de tempo (24, 48 e 72 horas) por ensaios imunoenzimáticos (ELISA). Após, será avaliado o envolvimento de citocinas (IL-1, IL-1ß e TNF-) na produção de MMP, utilizando anticorpos específicos anti-IL-1, anti-IL-1ß e anti-TNF- na cultura celular ativada por LPS. Para 2ª etapa, serão selecionados 36 dentes, de diferentes pacientes, com necrose pulpar e lesão periapical. Após isolamento absoluto, anti-sepsia e acesso ao canal radicular, será realizada a primeira coleta. Os terços cervical e médio serão preparados com instrumentos oscilatórios utilizando clorexidina gel 2%. Para o preparo manual do terço apical, de acordo com associação de agente irrigante, os canais serão divididos em 3 grupos (n=12): G1) clorexidina gel 2% + polimixina B; G2) clorexidina gel 2% + hidróxido de cálcio (0,14%); G3) clorexidina gel 2% (controle). Após instrumentação, será realizada a segunda coleta. Os canais serão inundados com EDTA e, após irrigação, será realizada a terceira coleta. Todos os canais receberão como medicação intracanal pasta de clorexidina gel 2% + hidróxido de cálcio P.A. por 14 dias. Após, os canais serão irrigados e será realizada a quarta coleta. Para todas as coletas será realizada quantificação de endotoxinas pelo teste cinético cromogênico do lisado de amebócitos de Limulus e avaliação dos efeitos citotóxicos pela produção de citocinas (IL-ß, TNF-) em cultura de macrófagos. Todos resultados serão analisados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%). (AU)