Caracterização citogenética e molecular do DNA ribossômico em triatomíneos
- Auxílios pontuais (curta duração)
| Processo: | 09/17816-8 |
| Linha de fomento: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Vigência: | 01 de março de 2010 - 29 de fevereiro de 2012 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Genética - Genética Animal |
| Pesquisador responsável: | Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira |
| Beneficiário: | Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira |
| Instituição-sede: | Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Rhodnius Triatoma Panstrongylus |
Resumo
A importância dos triatomíneos em parasitologia humana deve-se ao fato de serem transmissores do Trypanosoma cruzi, agente causal da doença de Chagas. Disseminada por grandes extensões do Brasil e de outros países latino-americanos, essa doença representa um grave e importante problema de saúde pública, não apenas pelos elevados índices de prevalência, como também pelos danos que causa à população. Além de sua importância médica, os triatomíneos também são de interesse citogenético porque seus cromossomos possuem cinetócoros difusos, isto é, distribuídos ao longo dos cromossomos, além de uma forma incomum da meiose, na qual a segregação dos cromossomos sexuais ocorre apenas na segunda divisão. Dados citogenéticos sobre os triatomíneos tem sido obtidos com base na investigação cromossômica comparativa por meio de colorações convencionais. No entanto, a natureza holocêntrica dos cromossomos dos triatomíneos representa um grande obstáculo aos estudos citogenéticos, sendo assim, o emprego de técnicas citoquímicas especiais e de citogenética molecular poderão auxiliar sobremaneira a distinção da composição de bases das regiões heterocromáticas e a localização precisa das Regiões Organizadoras Nucleolares (RONs). Essas representam as regiões cromossômicas que contém um cluster de cópia múltipla de genes RNA ribossomal (DNAr), que são responsáveis pela biogênese dos ribossomos e estão envolvidos na formação do nucléolo. Durante a divisão celular essa organela organiza-se e reorganiza-se por um processo denominado nucleologênese. Os estudos sobre o ciclo e a atividade nucleolar são escassos e há muito ainda a ser entendido, principalmente na divisão celular meiótica. No presente projeto, os triatomíneos servirão como modelo biológico para o estudo da estrutura cromossômica holocêntrica, da nucleologênese e de outros fenômenos meióticos específicos da espermatogênese. Os principais objetivos deste estudo são: a) analisar comparativamente as diversas fases da espermatogênese em espécies do gênero Triatoma, Rhodnius e Panstrongylus; b) Estudar o ciclo nucleolar durante a divisão celular; c) Detectar as Regiões Organizadoras Nucleolares (RONs) nos cromossomos meióticos (células gaméticas) e mitóticos (células somáticas), bem como a localização de sítios do DNA ribossômico 28S; d) Analisar e comparar o padrão de distribuição e a composição de bases das regiões heterocromáticas nos núcleos interfásicos e nos cromossomos das espécies estudadas. Essas análises auxiliarão no entendimento dos processos de evolução e adaptação ocorridos nesses hematófagos. Para a realização do presente trabalho serão utilizados testículos provenientes de insetos adultos jovens (para o estudo dos cromossomos meióticos, da espermatogênese e do ciclo nucleolar) e gânglios cerebrais de embriões (para a análise dos cromossomos mitóticos). As lâminas citológicas serão preparadas por esmagamento e espalhamento dos órgãos e, posteriormente, submetidas às seguintes técnicas citoquímicas: Orceína lacto-acética; Impregnação com íons prata; Bandamento C e coloração pela variante da técnica da Concentração Crítica de Eletrólitos (CEC). Para a análise citogenética molecular serão utilizados bandamentos por fluorocromos (Cromomicina A3, DAPI-distamicina DA, alaranjado de acridina). Os resultados obtidos deverão contribuir para o esclarecimento da estrutura cromossômica, elucidando, inclusive questões sobre as relações filogenéticas desse grupo e, também, sobre o papel da atividade nucleolar nos eventos característicos que ocorrem durante o processo de diferenciação das células espermatogênicas. (AU)