Extração e pré-purificação de proteínas recombinantes produzidas nas folhas de tabaco transgênico usadas como biorreatores

• Processo: 07/58766-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2010
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Processos Industriais de Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Everson Alves Miranda
• Beneficiário: Everson Alves Miranda
• Instituição Sede: Faculdade de Engenharia Química (FEQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Reatores biológicos Plantas geneticamente modificadas Proteínas recombinantes Purificação de proteínas Tabaco Clarificação Biosseparação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biosseparacao | Clarificacao | Extracao | Processo | Proteina Recombinante | Purificacao

Resumo

Plantas transgênicas têm sido sistemas cada vez mais estudados, e já utilizados em escala comercial, como biorreatores para a produção de proteínas recombinantes. Dentre diversas plantas consideradas, o tabaco, devido ao seu largo uso como modelo e a sua alta produtividade de biomassa, é uma das plantas mais empregadas e várias proteínas já foram produzidas em suas folhas. No entanto, existem problemas conectados com a estabilidade de proteínas recombinantes em extratos de folhas, como também com as etapas de purificação, causadas principalmente pela desnaturação e precipitação por complexação de proteínas com polifenóis e clorofila. Uma solução para estes problemas seria a integração de metodologia de extração com o método escolhido de remoção destes compostos. Um método potencial para remoção destas impurezas é a eletrocoagulação, método no qual a dissolução de eletrodos de Al gera grandes redes insolúveis em água (gel de Al(OH)3), as quais podem adsorver quimicamente as substâncias a serem removidas da solução. Assim, o objetivo deste projeto é estudar liberação de proteínas recombinantes de folhas de tabaco seguida da clarificação do extrato por eletrocoagulação, focando a maximização da liberação da proteína recombinante e a minimização de polifenóis e clorofila extraídos e presentes no extrato após clarificação por eletrocoagulação. Como este estudo será realizado com o uso de duas técnicas de expressão (transformação estável e agroinfiltração) e com três proteínas recombinantes de características distintas ("synthetic green fluorescent protein", (ß-glucuronidase, e apoptina), se iniciará uma base de conhecimento sobre os melhores métodos de expressão e sobre proteínas mais adequadas para serem produzidas em folhas de tabaco transgênico. (AU)