Solicitação de patente da isoforma N-domínio da ECA (90 kDa), como marcador genético de hipertensão e dos métodos de quantificação desse marcador por espectrometria de massa e Western Blotting utilizando as isoformas de 190 kDa, 90 kDa e 65 kDa como padrões desse método

• Processo: 02/02921-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa de Apoio à Propriedade Intelectual (PAPI/Nuplitec)
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2010
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Dulce Elena Casarini
• Beneficiário: Dulce Elena Casarini
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 95/09168-1 - Enzima conversora de angiotensina I (ECA): estudo de novas isoformas, fragmentos N-terminal de ECA em modelos experimentais por PCR e cultura de células mesangiais. Sequência por química de proteínas, AP.R
• Assunto(s): Marcadores genéticos Hipertensão Espectroscopia de massa Cromatografia líquida Patentes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Eca N-Dominio

Resumo

Coleta de fluidos como por exemplo urina, tecido ou células de organismos vivos, que serão submetidos a separação cromatográfica (resina AcA44 e/ou AcA 34; coluna de fase reversa C-18, espectrometro de massa) e por Western Blotting (utilizando anticorpo específico contra ECA somática e contra ECA N-domínio [90 kDa, marcador genético de hipertensão e 65 kDa] das isoformas de 190 kDa, 90 kDa e 65 kDa. As isoformas de 190 kDa e 65 kDa estarão presentes em indivíduos normais; enquanto que a isoforma de 90 kDa (marcador genético de hipertensão) caracterizará aqueles predispostos ao desenvolvimento de hipertensão e lesões em órgãos alvo característicos (coração, sistema nervoso, vasculatura e rim). Uma alíquota de fluido (por exemplo, urina fresca ou concentrada), células e tecidos serão processados e analisados por método de cromatografia líquida de alta performance com detecção por espectrometria de massa (HPLC-MS) ou diretamente no detector de massa, onde a amostra em análise é comparada aos padrões previamente estabelecidos para as isoformas da ECA de 190 kDa, 90 kDa (marcador genético de hipertensão) e 65 kDa. Uma alíquota de fluido (por exemplo, urina fresca ou concentrada), células e tecidos serão processados e analisados por Westem Blotting utilizando anticorpos específicos contra ECA de 190 kDa e as ECAs N-domínio (90 kDa, marcador genético de hipertensão e 65 kDa), utilizando como controles da análise as isoformas da ECA preparadas como padrões e a enzima recombinante da ECA. (AU)

Patente(s) depositada(s) como resultado deste projeto de pesquisa