Análise bioquímica e antigênica de proteases de trofozoítos de cepas de Giardia duodenalis, isoladas e axenizadas em Botucatu, São Paulo

• Processo: 00/07332-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2003
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia
• Pesquisador responsável: Semíramis Guimarães Ferraz Viana
• Beneficiário: Semíramis Guimarães Ferraz Viana
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Giardia lamblia Trofozoítos Peptídeo hidrolases Antígenos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antigenos | Cepas Axenicas | Giardia Duodenalis | Lisados | Produtos De Excrecao Secrecao | Proteases

Resumo

Ainda são escassos os estudos que analisam a atividade de proteases em trofozoítos de cepas axênicas, principalmente comparando cepas obtidas de indivíduos com giardíase sintomática com aquelas obtidas de indivíduos assintomáticos. O presente projeto propõe realizar a análise de proteases presentes em trofozoítos de cinco cepas (BTU-I. BTU-2. BTU- 6, BTU-10 e BTU-11) de Giardia duodenalis isoladas e axenizadas em Botucatu, tendo por referência a cepa padrão Portland I, isolada e axenizada nos Estados Unidos. O objetivo desse estudo é o de identificar e caracterizar proteases de Giardia, bem como, investigar diferenças entre as cepas. Para cada cepa em estudo, preparações de proteínas obtidas de trofozoítos rompidos (lisados) e de produtos liberados no meio de cultura axênico (produtos de excreção-secreção) serão empregadas nas diferentes etapas deste trabalho. Inicialmente, lisados e produtos de excreção-secreção serão analisados quanto ao perfil eletroforético pelo fracionamento das proteínas em gel de poliacrilamida (SDS - PAGE) e coloração pela prata. Para a detecção de proteases e análise quantitativa da atividade proteolítica das mesmas preparações de proteínas serão empregadas na eletroforese em gel de poliacrilamida copolimerizado com gelatina e em ensaio espectofotométrico empregando proteína como substrato. Além de demonstrar a atividade proteolítica, o presente estudo pretende caracterizar as proteases presentes nos lisados e nos produtos de excreção-secreção quanto à natureza e à antigenicidade, empregando, respectivamente, ensaios com inibidores de proteases específicos e a técnica de imunoprecipitação com proteína A-Staphylococcus aureus. (AU)