Análise da atividade antifúngica de chalconas e perfil transcricional de genes envolvidos na síntese da parede celular no dermatófito Trichophyton rubrum

• Processo: 11/06124-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Fachin Saltoratto
• Beneficiário: Ana Lucia Fachin Saltoratto
• Instituição Sede: Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP). Campus Ribeirão Preto. Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Mozart de Azevedo Marins ; Suzelei de Castro França
• Bolsa(s) vinculada(s): 12/21433-0 - Análise da atividade antifúngica de chalconas e perfil transcricional de genes envolvidos na síntese da parede celular no dermatófito Trichophyton rubrum., BP.TT; 11/12742-6 - "Análise da atividade antifúngica de chalconas e perfil transcricional de genes envolvidos na síntese da parede celular no dermatófito Trichophyton rubrum", BP.TT
• Assunto(s): Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antifúngicos naturais | Chalconas | Dermatófitos | mutantes resistentes | Parede celular | Real Time | Expressão gênica em microorganismos

Resumo

O dermatófito Trichophyton rubrum (T.rubrum) é o agente causador mais freqüente de dermatomicoses superficiais no Brasil e no mundo. Apesar da importância das micoses, somente um número limitado de drogas antifúngicas está disponível atualmente no mercado devido à falta de alvos adequados, pois alguns são também muito tóxicos em humanos. A parede celular dos fungos realiza funções essenciais para o desenvolvimento: proteção física contra outros microrganismos, manutenção do equilíbrio osmótico da célula, regulação da forma da célula e também media a comunicação entre as células fúngicas. Além disso, a parede celular desempenha função crucial na infecção do hospedeiro, protegendo o fungo e interagindo diretamente com o sistema imune do hospedeiro. Em vista disto e do fato dos componentes da parede celular de muitos fungos patogênicos não estarem presentes nas células de mamíferos, a parede celular dos fungos tornou-se um alvo importante para o desenvolvimento de antifúngicos com novo mecanismo de ação e pouca toxicidade para os humanos. A parede celular dos fungos consiste de uma camada externa de manoproteínas e uma camada interna composta por ²-1,3-glicano/quitina, com algumas manoproteínas entreleçadas. As manoproteínas, o ²-1,3-glicana e a quitina da parede celular servem como alvo para estes fármacos com novo mecanismo de ação. As chalconas (1,3-diaril-2-propeno-1) são flavonóides de cadeia aberta amplamente biossintetizados nas plantas e que apresentam expressiva atividade antifúngica, devido a sua porção enona que liga-se ao grupamento tiol de certas proteínas O mecanismo de ação das chalconas é inibir a biossíntese da parede celular, mas precisamente na sua capacidade de inibir in vitro a ²(1,3)-glucana sintase e a ²(1,3)-chitina sintase, enzimas que catalizam a biossíntese dos polímeros ²(1,3)-glucana e chitina da parede celular, respectivamente. Paralelamente, os genes de T.rubrum envolvido na síntese de parede celular têm sido analisados em experimentos de microarranjo começaram a ser anotados e revelaram a modulação de 8 genes envolvidos na biossíntese da parede celular deste fungo. Além disso, o estudo de novos antifúngicos deve levar em conta a compreensão dos mecanismos de resistência a estes compostos para prevenir o surgimento de linhagens reincidentes. Desta forma, neste projeto pretendemos isolar mutante(s) resistente(s) a chalcona; determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de 6 diferentes tipos de chalconas nas linhagens mutantes resistente a chalcona, selvagem e mutante sensível TruMDR2 (já disponível no nosso laboratório). Posteriormente a chalcona mais efetiva será utilizada no cultivo das linhagens selvagem e mutante resistente a chalcona para os experimentos de regeneração em protoplastos, testes morfológicos e de perfil de expressão de genes de T.rubrum envolvidos na síntese da parede celular por Real Time PCR. (AU)