Transcriptoma do dermatófito Trichophyton rubrum em resposta ao antifúngico transchalcona em condições de cultivo que simulam a infecção

• Processo: 12/02920-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2012
• Vigência (Término): 31 de dezembro de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Fachin Saltoratto
• Beneficiário: Tamires Aparecida Bitencourt
• Instituição Sede: Universidade de Ribeirão Preto (UNAERP). Campus Ribeirão Preto. Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Virulência Análise de sequência com séries de oligonucleotídeos Arthrodermataceae Dermatófitos Antifúngicos Expressão gênica Chalconas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antifungicos | Chalconas | Dermatófitos | expressão gênica | microarray | Patogenicidade | expressão gênica

Resumo

O dermatófito Trichophyton rubrum (T.rubrum) é o agente causador mais freqüente de dermatomicoses superficiais no Brasil e no mundo. Os dermatófitos são adaptados a crescerem na unha, pele e cabelo pelo uso de uma variedade de proteínas do hospedeiro (principalmente queratina) como nutriente. Para entender a complexa interação do fungo com o hospedeiro pode-se identificar os genes diferencialmente expressos por técnicas de expressão gênica em larga escala, simulando a infecção da pele humana através da utilização de meio de cultura mínimo incluindo a queratina ou elastina como fonte de proteína. Além disso, apesar da importância das micoses, somente um número limitado de drogas antifúngicas está disponível atualmente no mercado devido à falta de alvos adequados, pois alguns são também muito tóxicos em humanos. Os agentes antifúngicos exercem a sua atividade através de uma variedade de mecanismos moleculares, que na maioria das vezes são pobremente entendidos em dermatófitos. Dentre as novas abordagens moleculares, a ferramenta de cDNA microarray pode ser útil para obter uma visão global dos efeitos mediados por novas drogas antifúngicas com alvos diferenciados. As chalconas são flavonoídes que possuem atividade antifúngica pronunciada principalmente contra dermatofitos. O mecanismo de ação da maioria das chalconas é complexo e parece atuar em vários alvos na célula, um deles é a inibição da biossíntese da parede celular, mas há evidências na literatura que ela também possa atuar na atividade da enzima acido graxo sintase (FAS), pode inibir a topoisomerase e pode atuar na mitoncondria das células. Em um projeto do nosso grupo de pesquisa (Processo Fapesp 2009/12419-0) a transchalcona apresentou atividade antifúngica contra T.rubrum (CIM de 7,5µg/ml) muito mais pronunciada que o controle utilizado fluconazol (CIM=63µg/ml), a transchalcona reduziu o conteúdo de ergosterol e inibiu a regeneração dos protoplastos. Nos experimentos de PCR quantitativo a transchalcona reprimiu o gene FAS1 (envolvido na síntese de ácido graxo) e o gene ERG6 (síntese do ergosterol). Estes resultados reforçam que a transchalcona é promissora para uso como novo antifúngico, pois este composto parece atuar em vários alvos na célula, interferindo na síntese da parede celular, ácido graxo e ergosterol. Dessa forma, o presente projeto tem como objetivo avaliar pela técnica de microarray o perfil transcricional de T.rubrum na presença de transchalcona em condições de cultivo que mimetizam a infecção superficial ou profunda na pele humana (meio mínimo suplementado com queratina ou elastina, respectivamente). Além disso, após a validação, mutantes nulos para alguns genes envolvidos na resposta a drogas e a infecção serão construídos através de disrupção gênica ou RNA interference com o intuito de comprovar a sua funcionalidade.

Publicações científicas

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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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BITENCOURT, TAMIRES APARECIDA; MACEDO, CLAUDIA; FRANCO, MATHEUS ELOY; ROCHA, MARINA CAMPOS; MORELI, IGOR SAWASAKI; MICHELOTO CANTELLI, BRUNA ALINE; SANCHES, PABLO RODRIGO; BELEBONI, RENE OLIVEIRA; MALAVAZI, IRAN; PASSOS, GERALDO ALEIXO; et al. Trans-chalcone activity against Trichophyton rubrum relies on an interplay between signaling pathways related to cell wall integrity and fatty acid metabolism. BMC Genomics, v. 20, MAY 22 2019. (16/22701-9, 12/02920-7, 15/23435-8)

BITENCOURT, TAMIRES APARECIDA; MACEDO, CLAUDIA; FRANCO, MATHEUS ELOY; ASSIS, AMANDA FREIRE; KOMOTO, TATIANA TAKAHASI; STEHLING, ELIANA GUEDES; BELEBONI, RENE OLIVEIRA; MALAVAZI, IRAN; MARINS, MOZART; FACHIN, ANA LUCIA. Transcription profile of Trichophyton rubrum conidia grown on keratin reveals the induction of an adhesin-like protein gene with a tandem repeat pattern. BMC Genomics, v. 17, MAR 18 2016. (14/23841-3, 12/02920-7, 12/03845-9)

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KOMOTO, TATIANA TAKAHASI; BITENCOURT, TAMIRES APARECIDA; SILVA, GABRIEL; BELEBONI, RENE OLIVEIRA; MARINS, MOZART; FACHIN, ANA LUCIA. Gene Expression Response of Trichophyton rubrum during Coculture on Keratinocytes Exposed to Antifungal Agents. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine, v. 2015, p. 7-pg., 2015-01-01. (12/02920-7, 12/03845-9)

FRANCO, MATHEUS ELOY; BITENCOURT, TAMIRES APARECIDA; MARINS, MOZART; FACHIN, ANA LUCIA. In silico characterization of tandem repeats in Trichophyton rubrum and related dermatophytes provides new insights into their role in pathogenesis. DATABASE-THE JOURNAL OF BIOLOGICAL DATABASES AND CURATION, v. N/A, p. 10-pg., 2017-06-11. (14/23841-3, 12/02920-7, 12/03845-9)