Purificação da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase por sistemas micelares de duas fases aquosas contendo ligantes de afinidades

• Processo: 04/00775-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Engenharia de Alimentos
• Pesquisador responsável: Adalberto Pessoa Junior
• Beneficiário: Adalberto Pessoa Junior
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biotecnologia Extração líquido-líquido Enzimas Glucosefosfato desidrogenase Micelas Ligantes Tensoativos Sistema de duas fases aquosas Processamento downstream
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Downstream Processing | Duas Faces Aquosas | Enzima | Extracao Liquido-Liquido | Ligantes De Afinidades | Purificacao

Resumo

O presente projeto visa o desenvolvimento de novas estratégias para a purificação da enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) pela tecnologia de extração líquido-líquido em sistemas micelares de duas fases aquosas. Esse sistema proporciona uma ambiente favorável às biomoléculas, permitindo o controle e otimização da purificação conforme as condições empregadas. Serão estudados alguns dos fatores que influenciam a partição da G6PD, como por exemplo: tipo e concentração de diferentes agentes tensoativos não-iônicos (C10E4 e Triton X-114), temperatura e adição de ligantes de afinidade (cibacron blue e procion red). Será estudada ainda a síntese de tensoativos de afinidade, através da ligação covalente de cibacron blue e procion red aos tensoativos não-iônicos. Os resultados obtidos experimentalmente serão aplicados em modelos matemáticos recentemente desenvolvidos, de modo a verificar a aplicabilidade dos mesmos para estimar coeficientes de partição nos sistemas micelares de duas fases aquosas. Os parâmetros cinéticos da G6PD (KM, Vmax e Ki) serão estudados, com o intuito de se determinar o tipo de inibição exercida por cada inibidor (cibacron blue, procion red, e respectivos tensoativos de afinidade), bem como quantificar a força de interação entre o ligante (inibidor) e a enzima (Ki). (AU)