GPC3 reduz proliferação celular em linhagens celulares de carcinoma renal

• Processo: 14/18604-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2014
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2015
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Paula Rahal
• Beneficiário: Paula Rahal
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Genética do câncer Proliferação celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cell lines | cell proliferation | Gpc3 | renal carcinoma | transfection | Genética do câncer

Resumo

Introdução: Glipican 3 (GPC3) é um membro da família das proteoglicanas de heparan sulfato (HSPGs). O gene GPC3 atua no controle da migração celular, regulando negativamente o crescimento celular e induzindo apoptose. GPC3 apresenta baixa expressão em vários cânceres, o que pode resultar em crescimento celular descontrolado e também contribuir para o fenótipo maligno de alguns tumores. A proposta deste estudo foi analisar o mecanismo de ação do gene GPC3 em carcinoma renal de célula clara. Métodos: Cinco linhagens celulares e amostras de carcinoma renal de células claras foram utilizadas para analisar expressão do mRNA de GPC3 (qRT-PCR). Em seguida, linhagens celulares representativas, uma primária (786-O) e uma metastática de carcinoma renal (ACHN), foram escolhidas para prosseguir com os estudos funcionais. Construímos um vetor de expressão de GPC3 e transfectamos nas linhagens celulares de carcinoma renal, 786-O e ACHN. A superexpressão de GPC3 foi analisada por qRT-PCR e imuno-histoquímica. Avaliamos a proliferação celular usando os ensaios de MTT e formação de colônias. A técnica de citometria de fluxo foi utilizada para analisar apoptose e ciclo celular. Resultados: Observamos que GPC3 está com baixa expressão nas amostras e linhagens celulares de carcinoma renal de células claras comparado com amostras de rim normais. A expressão de mRNA de GPC3 e o nível desta proteina nas linhagens 786-O e ACHN aumentou após transfecção com vetor de expressão de GPC3, e a taxa de proliferação celular de ambas linhagens celulares diminuiu após superexpressão de GPC3. Além disso, a apoptose não foi induzida nas células de carcinoma renal superexpressando GPC3, e houve um aumento da população de células na fase G1 do ciclo celular. Conclusão: Sugerimos que o gene GPC3 reduz a taxa de proliferação celular através da parada do ciclo celular das células de carcinoma renal na fase G1. (AU)