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Microsporidiose murina - o papel de Macrófagos M1 e M2, fagócitos derivados de Células B-1 e eferocitose

Processo: 15/25948-2
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de abril de 2016 - 31 de março de 2018
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária
Pesquisador responsável:Maria Anete Lallo
Beneficiário:Maria Anete Lallo
Instituição-sede: Vice-Reitoria de Pós-Graduação e Pesquisa. Universidade Paulista (UNIP). São Paulo , SP, Brasil
Pesq. associados:Anuska Marcelino Alvares Saraiva ; Diva Denelle Spadacci Morena ; Elizabeth Cristina Perez Hurtado ; Fabiana Toshie de Camargo Konno ; Paulo Ricardo Dell'Armelina Rocha
Assunto(s):Microsporídios  Encephalitozoon cuniculi  Imunologia veterinária  Macrófagos 

Resumo

Os microsporídios infectam vertebrados e invertebrados e são reconhecidos como agentes oportunistas em indivíduos com deficiências imunológicas. Embora a atividade de linfócitos T CD8+ seja primordial para eliminar os microsporídios, atribui-se aos macrófagos um papel crítico na imunidade inata e na ativação da imunidade adquirida. Para alguns agentes infecciosos, a polarização de macrófagos M1 e M2 é fundamental na definição do rumo que a infecção irá tomar, assim como se cogita que a eferocitose contribui como mecanismo facilitador e promotor da infecção. Para a microsporidiose estes fenômenos não foram analisados, assim como não está totalmente claro o papel das células B-1 e sua relação com os macrófagos. Dessa forma, o presente projeto tem como objetivo avaliar a atividade in vitro de células fagocíticas na infecção pelo microsporídio Encephalitozoon cuniculi, particularmente pela análise de fagócitos derivados de células B-1 (B-1 CDP), de macrófagos polarizados M1 e M2 e de eferocitose. Para tal serão realizados 3 experimentos: 1- a avaliação da atividade de células B-1 e de fagócitos B-1 (B-1 CDP) será feita pela inoculação de E. cuniculi em culturas de células obtidas de lavado peritoneal de camundongos BALB/c, BALB/c XID e em culturas de B-1 CDP; 2- a análise da atividade de macrófagos M1 e M2 pela inoculação de E. cuniculi em macrófagos obtidos de precursores de medula óssea (MOP) de camundongos BALB/c, BALB/c XID e C57Bl/6 e diferenciados em macrófagos M1 (com LPS e IFN-³ recombinante) e em M2 (com as citocinas recombinantes IL-4, IL-13 e IL-33); 3- avaliação de eferocitose e atividade antiinflamatória com MOP e tratados ou não com inibidores de COX (Indometacina), agonista e antagonista de receptores EP2, posteriormente os MOPs serão incubados com células apoptóticas e então serão desafiados com E. cuniculi. A adesão e captação de E. cuniculi serão avaliadas com os marcadores SCRI Renaissance Stain 2200 e PKH26 Fluorescent Cell Linker. As quantificações de óxido nítrico e citocinas serão realizadas a partir dos sobrenadantes das culturas nos diferentes tempos utilizados (0,5h, 1h, 48h, 96h e 144h). Adicionalmente, as culturas serão estudadas por microscopia eletrônica de transmissão, para a compreensão da relação estabelecida com o microsporídio. A análise de variância ANOVA com uma ou duas vias será empregada para comparação entre os grupos. Os valores serão apresentados como média (±erro padrão) das replicatas experimentais, com significância de p< 0,05. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
COSTA DE MOURA, MARIA LUCIA; ALVARES-SARAIVA, ANUSKA MARCELINO; PEREZ, ELIZABETH CRISTINA; XAVIER, JOSE GUILHERME; SPADACCI-MORENA, DIVA DENELLE; SERANTONI MOYSES, CARLA RENATA; DELL'ARMELINA ROCHA, PAULO RICARDO; LALLO, MARIA ANETE. Cyclophosphamide Treatment Mimics Sub-Lethal Infections With Encephalitozoon intestinalis in Immunocompromised Individuals. FRONTIERS IN MICROBIOLOGY, v. 10, SEP 25 2019. Citações Web of Science: 0.
PEREIRA, ADRIANO; ALVARES-SARAIVA, ANUSKA MARCELINO; DE CAMARGO KONNO, FABIANA TOSHIE; SPADACCI-MORENA, DIVA DENELLE; PEREZ, ELIZABETH CRISTINA; MARIANO, MARIO; LALLO, MARIA ANETE. B-1 cell-mediated modulation of M1 macrophage profile ameliorates microbicidal functions and disrupt the evasion mechanisms of Encephalitozoon cuniculi. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 13, n. 9 SEP 2019. Citações Web of Science: 0.

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