Efeitos da centrifugação do sêmen em camada única de Percoll Plus® antes da congelação sobre as características morfo-funcionais de espermatozoides avaliadas in vitro e in vivo após IATF

• Processo: 15/20986-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2018
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Alicio Martins Júnior
• Beneficiário: Alicio Martins Júnior
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Camila de Paula Freitas Dell´Aqua ; Diego Gouvea de Souza
• Assunto(s): Sêmen Congelamento Inseminação artificial em tempo fixo Centrifugação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: análise espermática | centrifugação | colóide | congelação | Iatf | sêmen | Inseminação Artificial - Congelação de Sêmen

Resumo

O presente trabalho tem por objetivo verificar os efeitos da seleção espermática, pré-congelação, através de centrifugação em camada única de Percoll Plus® (CCUPP), em diferentes concentrações de coloide, com ou sem pré-diluição do sêmen, bem como de diferentes concentrações de espermatozoides/palheta, avaliando-se as características morfo-funcionais de espermatozoides bovinos, in vitro, pós-descongelação, além da taxa de FIV e IATF. O sêmen de quatro touros Nelores, mantidos em central de IA, será coletado através de vagina artificial. No exp. 1, o ejaculado de cada um dos touros (seis replicas) será misturado e dividido igualmente (1 bilhão de espermatozoides) entre os grupos, sem diluição (SD) ou diluído (D), meio base de congelação, na concentração de 250 x 106 de espermatozoides/mL, antes da CCUPP, em gradientes de coloide de 90% e 70%, constituindo os grupos 90SD, 70SD, 90D e 70D. No exp. 2, doses inseminantes com 30, 20 e 15 x 106 de espermatozoides serão comparadas, após congelação, a partir de amostras seminais previamente obtidas através de CCUPP (adotando-se o melhor resultado do exp. 1). No exp. 3, dois grupos, sendo um controle (sem CCUPP) e outro com CCUPP serão comparados, adotando-se o melhor resultado do experimento 2. Em todos os experimentos a seleção espermática será feita com deposição do sêmen sobre uma coluna de 9 mL de Percoll Plus®, montada em tubo de 15 mL, seguida de centrifugação a 700 x g/13 min. A seguir, as amostras serão congeladas/descongeladas para análises de cinética espermática(CASA), morfologia, alterações morfo-funcionais (sondas fluorescentes; integridade de membrana plasmática - MP, integridade de membrana acrossomal, função mitocondrial, ROS intracelular, peroxidação lipídica, estabilidade de MP, fosforilação da tirosina e estrutura da cromatina; em citômetro de fluxo), além da observação das taxas de FIV e de concepção, após IATF. ANOVA e testes de Tukey, de regressão logística e de correlação de Pearson serão empregados para análise dos resultados, com P<0,05 aceito como significativo. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MARTINS, ALICIO, JR.; DA CRUZ, TAIRINI E.; MARQUI, FERNANDA N.; DE SOUZA, DIEGO G.; BERTON, TATIANA I. U.. Evaluation of Percoll PLUS as a cushion solution during single layer centrifugation of fresh bull semen: Effects on frozen/thawed spermatozoa motility. Animal Reproduction Science, v. 194, p. 1-pg., 2018-07-01. (15/20986-3)

DA CRUZ, TAIRINI ERICA; MARTINS, ALICIO, JR.; MARQUI, FERNANDA NUNES; UHERARA BERTON, TATIANA ISSA; FREITAS-DELL'AQUA, CAMILA DE PAULA; DELL'AQUA, JOSE ANTONIO, JR.. Evaluation of lipid membrane peroxidation, mitochondria! membrane potential and oxidative stress on bull semen frozen with reduced sperm number after colloidal single layer centrifugation. Animal Reproduction Science, v. 194, p. 3-pg., 2018-07-01. (15/20986-3)