Estudo das proteinas quinases CDK8 e CDK10 a partir da expressão heteróloga em E. coli

• Processo: 16/25893-6
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2019
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Fernanda Canduri
• Beneficiário: Fernanda Canduri
• Instituição Sede: Instituto de Química de São Carlos (IQSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas Expressão heteróloga Proteínas quinases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: docking molecular | estrutura terciária | expressão heteróloga | Interação proteína-ligante | Proteina quinase | Proteínas

Resumo

Proteínas quinases são importantes alvos de estudo devido ao seu envolvimento na sinalização celular, transcrição e divisão celular. Quinases dependentes de ciclinas (CDKs) compreendem uma família de proteínas que podem ser subdivididas em dois grupos funcionais majoritários baseados na sua função no ciclo celular e/ou controle transcricional. Os complexos da CDK10 se associam com o fator de transcrição Ets2, e está envolvida com "splicing" de RNA, regulação de hormônios esteroides, além de ser um regulador transcricional. A CDK8 possui um motivo de ligação a mediadores, sendo, portanto, parte do complexo mediador da transcrição. Nesta proposta, as CDK8 e CDK10 serão superexpressas e purificadas seguindo protocolo já estabelecido, e estudos funcionais e estruturais serão realizados, com o objetivo de alcançar maior entendimento do diferencial com relação a estrutura-função de cada uma delas. O estudo estrutural será realizado utilizando métodos de dicroísmo circular e métodos de cristalização na tentativa de se obter cristais das proteínas para difração e resolução de estrutura. Adicionalmente, estudos de docking molecular irá auxiliar na busca por ligantes ATP competitivos que nortearão os estudos funcionais das referidas CDKs na presença dos diferentes ligantes previamente selecionados, utilizando métodos de espectrofotometria UV/Vis. Estes estudos poderão contribuir para o entendimento do modo de interação das CDK8 e CDK10 com ligantes ATP competitivos, bem como para o desenvolvimento de inibidores químicos de baixo peso molecular que possa inibir especificamente estas quinases. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

COELHO, FERNANDA; PEPINO, REBEKA DE OLIVEIRA; ALENCAR, DIANDRA PINHEIRO; SANTOS, JESSYKA LIMA; CANDURI, FERNANDA. Overexpression and refolding of human Cyclin D3. A reliable method or not?. Process Biochemistry, v. 99, p. 196-201, DEC 2020. (16/25893-6)