Expressão e purificação das proteínas cinases humanas NEK1 E NEK6 para estudos estruturais e funcionais

• Processo: 06/04683-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Gabriela Vaz Meirelles
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Purificação de proteínas Doenças renais policísticas Ciclo celular Reparo do DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ciclo Celular | Conserto De Dna | Doenca Policistica Do Rim | Proteina Cinases | Função e estrutura de proteínas

Resumo

A proteína NIMA (Never In Mitosis, gene A) foi identificada e caracterizada funcionalmente em Aspergillus nidulans como sendo uma serina/treonina cinase crítica para a progressão do ciclo celular. Mutações no gene da NEK1, membro humano da família de NIMA cinases, levam ao desenvolvimento da doença renal policística (PKD) e ao aparecimento de diversos efeitos pleiotrópicos, sugerindo sua participação em vias reguladoras de diversos processos celulares. Estudos anteriores do nosso grupo, utilizando o sistema duplo-híbrido, resultaram na identificação de três grupos de proteínas que interagem com o domínio regulatório de NEK1: proteínas envolvidas no reparo de quebras de fita dupla de DNA durante a fase G2/M do ciclo celular, no desenvolvimento do sistema nervoso, e na etiologia da PKD. Em células humanas submetidas à radiação ionizante, NEK1 desloca-se para o núcleo e co-localiza-se com proteínas conhecidas por atuarem no reparo de DNA. Isso sugere seu envolvimento direto na resposta a danos de DNA. Neste projeto, pretendemos realizar a expressão e purificação de NEK1 e NEK6 em larga escala para ensaios biofísicos e de cristalização, visando análises estruturais. Em paralelo, serão realizados estudos funcionais envolvendo o silenciamento (iRNA) da expressão de NEK1 e sua superexpressão em células humanas e a identificação de proteínas que interagem intracelularmente com NEK1 ativada/fosforilada através de espectrometria de massa. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MEIRELLES, Gabriela Vaz. Estudos estruturais e funcionais das proteínas cinases humanas Nek1 e Nek6. 2011. Tese de Doutorado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.