Expressao de micro-rnas na retina e em musculo esqueletico de ratos diabeticos.

• Processo: 08/50294-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Fernando Luiz de Lucca
• Beneficiário: Thaís Amaral e Sousa
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Diabetes mellitus Retina Retinopatia diabética
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Diabetes | Micro Rnas | Nf Kb | Pkr | Retina | Retinopatia Diabetica

Resumo

A retinopatia diabética é uma das complicações mais freqüentes associadas a diabetes e uma das mais importantes causas de cegueira em países desenvolvidos. Um dos grandes desafios na pesquisa sobre micro-RNAs (miRNAs) é a elucidação dos mecanismos envolvidos na regulação da transcrição destes RNAs reguladores. O presente trabalho tem como objetivo principal o estudo da participação da PKR e do NF-kB na regulação da expressão do miR-146 na retina de ratos diabéticos, o que poderá contribuir para a elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos na retinopatia diabética e o estabelecimento de novas estratégias terapêuticas para esta importante e freqüente patologia ocular. Entre os objetivos específicos, podemos mencionar: 1. Investigar a expressão dos genes da PKR e RAX na retina de ratos normais e diabéticos em nível de RNA mensageiro e proteína através de RT-PCR em tempo real e Western blot, respectivamente; 2. Determinar o nível de ativação da PKR e fosforilação do elF2α na retina de ratos normais e diabéticos por Western blot usando os anticorpos, anti-phospho-PKR e anti-phospo-elF2α, respectivamente. 3 Avaliar a degradação do inibidor IKBß na retina de animais normais e diabéticos; 4. Estudar o perfil de expressão do miR-146 na retina de ratos normais e diabéticos por RT-PCR em tempo real; 5. Determinar a localização celular do miR-146 na retina de ratos normais e diabéticos por hibridização in situ; 6. Identificar os possíveis mRNA alvos do miR-146 por predição computacional e validar experimentalmente por ensaio de luciferase. Os nossos resultados preliminares indicam que a expressão do miR-146 e da PKR está aumentada na retina de ratos diabéticos em relação a retina de ratos normais. Esses resultados são promissores e estimulam o desenvolvimento do presente projeto. Este projeto de pesquisa será desenvolvido em colaboração com o laboratório da Dra. Annick Harel-Bellan (Instituí André Lwoff, Villejuif, França) que possui todas as condições para realizar os experimentos de hibridização in situ e os ensaios da luciferase. Estas metodologias tem sido utilizadas rotineiramente neste laboratório como indica o recente trabalho deste grupo de pesquisa (Nature Cell Biology 8: 278-284 2006). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SILVA‚ V.A.O.; POLESSKAYA‚ A.; SOUSA‚ T.A.; CORRÊA‚ V.M.A.; ANDRÉ‚ N.D.; REIS‚ R.I.; KETTELHUT‚ I.C.; HAREL-BELLAN‚ A.; DE LUCCA‚ F.L.. Expression and cellular localization of microRNA-29b and RAX‚ an activator of the RNA-dependent protein kinase (PKR)‚ in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats. MOLECULAR VISION, v. 17, p. 2228, 2011. (08/50294-2, 08/58325-4)

SILVA, VIVIANE A. O.; POLESSKAYA, ANNA; SOUSA, THAIS A.; CORREA, VANI M. A.; ANDRE, NAYARA DELGADO; REIS, ROSANA I.; KETTELHUT, ISIS C.; HAREL-BELLAN, ANNICK; DE LUCCA, FERNANDO L.. Expression and cellular localization of microRNA-29b and RAX, an activator of the RNA-dependent protein kinase (PKR), in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats. MOLECULAR VISION, v. 17, n. 241-43, p. 2228-2240, AUG 18 2011. (08/50294-2, 08/58325-4)