Expressao de micro-rnas na retina e em musculo esqueletico de ratos diabeticos.

Resumo

A retinopatia diabética é uma das complicações mais freqüentes associadas a diabetes e uma das mais importantes causas de cegueira em países desenvolvidos. Um dos grandes desafios na pesquisa sobre micro-RNAs (miRNAs) é a elucidação dos mecanismos envolvidos na regulação da transcrição destes RNAs reguladores. O presente trabalho tem como objetivo principal o estudo da participação da PKR e do NF-kB na regulação da expressão do miR-146 na retina de ratos diabéticos, o que poderá contribuir para a elucidação dos mecanismos moleculares envolvidos na retinopatia diabética e o estabelecimento de novas estratégias terapêuticas para esta importante e freqüente patologia ocular. Entre os objetivos específicos, podemos mencionar: 1. Investigar a expressão dos genes da PKR e RAX na retina de ratos normais e diabéticos em nível de RNA mensageiro e proteína através de RT-PCR em tempo real e Western blot, respectivamente; 2. Determinar o nível de ativação da PKR e fosforilação do elF2α na retina de ratos normais e diabéticos por Western blot usando os anticorpos, anti-phospho-PKR e anti-phospo-elF2α, respectivamente. 3 Avaliar a degradação do inibidor IKBß na retina de animais normais e diabéticos; 4. Estudar o perfil de expressão do miR-146 na retina de ratos normais e diabéticos por RT-PCR em tempo real; 5. Determinar a localização celular do miR-146 na retina de ratos normais e diabéticos por hibridização in situ; 6. Identificar os possíveis mRNA alvos do miR-146 por predição computacional e validar experimentalmente por ensaio de luciferase. Os nossos resultados preliminares indicam que a expressão do miR-146 e da PKR está aumentada na retina de ratos diabéticos em relação a retina de ratos normais. Esses resultados são promissores e estimulam o desenvolvimento do presente projeto. Este projeto de pesquisa será desenvolvido em colaboração com o laboratório da Dra. Annick Harel-Bellan (Instituí André Lwoff, Villejuif, França) que possui todas as condições para realizar os experimentos de hibridização in situ e os ensaios da luciferase. Estas metodologias tem sido utilizadas rotineiramente neste laboratório como indica o recente trabalho deste grupo de pesquisa (Nature Cell Biology 8: 278-284 2006). (AU)