Caracterização funcional e estrutural de uma fosfolipases A2 ácida da espécie Bothrops moojeni

• Processo: 07/01021-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Eliane Candiani Arantes Braga
• Beneficiário: Lucas Blundi Silveira
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 05/54855-0 - Toxinas animais: estrutura, função e aplicações biotecnológicas, AP.TEM
• Assunto(s): Toxicologia Fosfolipases A2 Bothrops Venenos de serpentes Expressão de proteínas Cristalografia de raios X
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bothrops moojeni | Clonagem e expressão | Fosfolipases A2 | Inflamação | sequencia de cDNA | venenos de serpentes | Toxinologia

Resumo

As serpentes do gênero Bothrops estão amplamente distribuídas pelo território brasileiro, sendo as responsáveis por mais de 90% dos acidentes ofídicos no Brasil. Devido a essa grande incidência de acidentes com serpentes deste gênero, seus venenos têm sido estudados por diversos grupos de pesquisa na tentativa de melhor entender os mecanismos de ação das proteínas que compõem esses venenos. A peçonha destas serpentes é constituída por componentes como proteases (metalo e serinoproteases), fosfolipases A2 (PLA2), L-aminoácido oxidases, entre outras, capazes de induzir diversos efeitos fisiopatológicos. As PLA2s hidrolisam fosfolipideos na posição 2-sn, liberando ácidos graxos livres e lisofosfolipídeos, os quais estão intimamente relacionados com o processo inflamatório. Nenhum estudo abordou a participação das PLA2 ácidas nos processos inflamatórios. Dentro deste contexto, para melhor compreender o mecanismo de ação dessas enzimas sobre a inflamação, este projeto propõe: (i) isolar uma fosfolipase A2 (PLA2) ácida nativa do veneno da serpente Bothrops moojeni; (ii) clonar e expressar a PLA2 ácida recombinante. A caracterização funcional destas enzimas (nativa e recombinante) será realizada em duas etapas; (iii) atividades enzimáticas (fosfolipásica sobre diferentes substratos) e farmacológicas (efeito sobre plaquetas, atividades anticoagulante, atitumoral e hipotensora); (iv) avaliação do efeito sobre a resposta inflamatória (ensaios sobre leucócitos in vivo e in vitro avaliando a expressão das enzimas COX-1 e COX-2, e liberação dos prostanóides PGE2 e PGD2) e finalmente; (iv) a caracterização estrutural, na tentativa de elucidar a estrutura tridimensional da proteína nativa por técnicas de cristalografia de raios X. Desta forma, este projeto permitirá, pela primeira vez, a elucidação do mecanismo de ação das PLA2s ácidas do gênero Bothrops sobre o processo inflamatório. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

SILVEIRA, Lucas Blundi. Caracterização funcional e estrutural de uma nova fosfolipase A2 ácida de Bothrops moojeni. 2012. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC) Ribeirão Preto.