Analise funcional da proteina jazigo: uma nova formina envolvida na morte celular programada da glandula salivar larval de drosophila melanogaster

• Processo: 09/50208-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ricardo Guelerman Pinheiro Ramos
• Beneficiário: Ana Paula Saita
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Drosophila melanogaster Desenvolvimento Morte celular programada
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Desenvolvimento | Drosophila Melanogaster | Forminas | Glandula Salivar Larval | Jazigo | Morte Celular Programada

Resumo

Em um "screen" genético procurando por mutações que afetassem a morte celular programada (MCP) durante o desenvolvimento de Drosophila, foi identificado um mutante que apresenta um drástico fenótipo defectivo, a persistência da glândula salivar larval (GSL), a qual é destinada a morrer durante o período pupal. O gene afetado foi denominado jazigo (jaz) e demonstrou grande homologia com a família de proteínas forminas, cuja principal função está relacionada ao remodelamento de actina. Durante o mestrado, produzimos anticorpos a-JAZ para de determinar sua localização subcelular na GSL durante a MCP, e analisar funcionalmente sua participação nesse processo. Determinamos o perfil hidropático de ambas às isoformas e observamos que ambas são basicamente hidrofílicas. Através de análises in silico verificamos que JAZ possui uma alta similaridade a forminas da subfamília FHOD. Uma dessas forminas FHOD1 é clivada por capazes e direcionadas ao núcleo em células HeLa. Fato esse muito similar àqueles por nós encontrados em ensaios de imunoprecipitação, onde observamos, dois polipeptídios, de 60 e 80 kDa, em extratos protéicos de GSL durante a MCP. Iniciamos ensaios funcionais in vivo, para observar o padrão de distribuição de JAZ durante a MCP dessas glândulas em animais selvagens e mutantes para JAZ. Nesses ensaios observamos que a proteína JAZ é inicialmente citoplasmática, porém com o transcorrer da MCP observa-se um progressivo acúmulo de JAZ no núcleo das células. Esse acúmulo é acompanhado de uma drástica diminuição de sua localização citoplasmática. A análise da distribuição de JAZ em glândulas salivares persistentes de animais mutantes revelou um distúrbio nesse padrão de distribuição gerando características em mosaico. Durante o doutorado, planejamos aprofundar os estudos funcionais da proteína JAZ com o intuito de entender o papel dessa proteína nos eventos de MCP durante o desenvolvimento, especialmente determinar qual seria sua função no interior do núcleo. Para tal pretendemos: analisar sua expressão em outros tecidos que sofrem MCP no desenvolvimento, e também a sua participação na embriogenêse, avaliar a capacidade de JAZ em polimerizar actina "in vitro", determinar o padrão de distribuição de JAZ em relação ao citoesqueleto de actina durante a MCP e identificar potenciais proteínas ligantes de JAZ. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ANHEZINI, LUCAS; SAITA, ANA PAULA; COSTA, MARA S. A.; PINHEIRO RAMOS, RICARDO GUELERMAN; SIMON, CLAUDIO ROBERTO. Fhos encodes a Drosophila Formin-Like Protein participating in autophagic programmed cell death. GENESIS, v. 50, n. 9, p. 672-684, SEP 2012. (09/50208-1, 07/59879-0)