Caracterização de novos genes alvo dos fatores de transcrição MEF2 em cardiomiócitos

• Processo: 09/17597-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Kleber Gomes Franchini
• Beneficiário: Mônica Siqueira Ferreira
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/54878-3 - Patogênese da hipertrofia e insuficiência cardíacas: mecanismos ativados por estimulo mecânico, AP.TEM
• Assunto(s): Miócitos cardíacos Cardiomegalia Fatores de transcrição MEF2 Imunoprecipitação da cromatina Eletroforese Análise de sequência de DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cardiomiócito | ChIP | fatores de transcrição | Hipertofia cardíaca | Mef2 | Fisiopatologia cardiovascular

Resumo

A hipertrofia é uma resposta compensatória dos cardiomiócitos a estresse mecânico e/ou injúria que ocorrem nas doenças cardíacas. Tal resposta é caracterizada por aumento do tamanho dos cardiomiócitos que resulta de ativação de vias de sinalização intracelular, expressão ampla de genes e organelogênese. Dentre os fatores de transcrição envolvidos no processo de hipertrofia miocárdica, estão os da família MEF2 (Myocyte Enhancer Factor-2), que é composto por 4 membros, MEF2A, MEF2B, MEF2C e MEF2D. Existem evidências demonstrando que fatores de transcrição MEF2 regulam diversos genes necessários para o desenvolvimento do coração em embriões de ratos e camundongos. Além disso, diversas evidências dão suporte à participação dos fatores da família MEF2 na regulação da expressão gênica do miocárdio em resposta a estímulos hipertróficos. Estudos recentes demonstraram que MEF2 é diretamente regulado por uma proteína nuclear, p300, que controla as fases adaptativa e mal-adaptativa da hipertrofia cardíaca in vivo. Ensaios de imunoprecipitação de cromatina realizados em nosso laboratório revelaram que MEF2 controla um trecho intrônico (pln-i1) do gene fosfoslamban (PLN) com característica regulatória. Dadas as recentes evidências demonstrando a importância dos fatores MEF2 na coordenação do controle gênico em resposta a estímulos mecânicos, o presente projeto tem como objetivo principal identificar e validar novos alvos da proteína MEF2 e, dessa forma, contribuir para o entendimento das vias regulatórias envolvendo fatores de transcrição MEF2. Para tanto, utilizaremos miócitos ventriculares de ratos neonatos (MVRNs) submetidos à sobrecarga pressora. Aplicaremos as técnicas de imunoprecipitação de cromatina (ChIP) seguida de sequenciamento, clonagem com gene repórter, eletroforese em gel shift (ou EMSA) e mutações. (AU)