Caracterizacao molecular e funcional de miosina v em compartimentos nucleares e centrossomos

• Processo: 09/54882-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2010
• Data de Término da vigência: 29 de agosto de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Roy Edward Larson
• Beneficiário: Claudia Tavares dos Santos
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Fracionamento celular Centrossomos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Centrossomos | Fosfo Mva | Fracionamento Celular | Nucleolos | Speckles

Resumo

Miosina-Va (MVa) é um motor molecular ativo que gera força e movimento sobre os filamentos de actina e está envolvida no transporte intracelular de organelas e RNA. Miosinas de várias classes surpreendentemente são presentes no núcleo onde estão envolvidas em funções ainda não bem esclarecidas. O anticorpo monoclonal 9E6 (mAb9E6) foi gerado contra um fosfo-peptídeo correspondente ao domínio da cauda globular da MVa que contém a serina 1650 e através deste anticorpo a MVa foi localizada nos núcleos celulares interfásicos associadas à speckles nucleares e em mitose nos centrossomos. Além disso, frente à inibição da transcrição por actinomicina D a MVa localiza-se nos nucléolos. Nosso objetivo neste trabalho é determinar os parceiros moleculares da MV nos speckles nucleares, nucléolos e nos centrossomos. Células HeLa e HEK293T serão transfectadas com proteínas recombinantes correspondentes aos domínios da MVa e MVc conjugadas ao GFP e analisadas por microscopia confocal. Também, serão aplicadas técnicas bioquímicas, como isolamento de speckles nucleares, nucléolos e centrossomos, imunomarcação em western blots, imunoprecipitação e pull down. Polipeptídios desconhecidos serão identificados por espectrometria de massa. Os dados preliminares do laboratório e da literatura dão suporte para a execução deste projeto, além da infra-estrutura presente no departamento. Esperamos, dessa forma, definir as moléculas que interagem com a MVa em seu estado fosforilado nestes compartimentos. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ASSIS, L. H. P.; SILVA-JUNIOR, R. M. P.; DOLCE, L. G.; ALBORGHETTI, M. R.; HONORATO, R. V.; NASCIMENTO, A. F. Z.; MELO-HANCHUK, T. D.; TRINDADE, D. M.; TONOLI, C. C. C.; SANTOS, C. T.; et al. The molecular motor Myosin Va interacts with the cilia-centrosomal protein RPGRIP1L. SCIENTIFIC REPORTS, v. 7, MAR 7 2017. (04/08868-0, 14/09720-9, 14/18189-5, 09/54014-7, 09/54882-9, 11/20229-7, 09/08312-6)