Identificação e estudo funcional de parceiros de interação e substratos de NEK1 e NEK2 no centrossomo humano e caracterização da sua relevância em ciliopatias

• Processo: 20/16265-7
• Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Vigência (Início): 01 de setembro de 2021
• Vigência (Término): 31 de julho de 2022
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Ivan Rosa e Silva
• Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/03489-1 - De estudos funcionais à busca de novos inibidores anticâncer: explorando cinases reguladores do ciclo celular da família de NEK humana, AP.TEM
• Assunto(s): Biologia estrutural Fosforilação Proteínas quinases Centrossomos Ciclo celular Ciliopatias Espectrometria de massas

Resumo

O centríolo é fundamental para a formação do centrossomo, que é o centro organizador de microtúbulos essencial para a divisão celular em células proliferativas. O centríolo também está envolvido com a formação de cílios, cuja função está associada à recepção de sinais extracelulares como antenas em células quiescentes e ao movimento de fluidos no ambiente extracelular. Por causa das suas funções essenciais para a vida humana, esse complexo proteico é altamente regulado. Entre as suas proteínas reguladoras menos estudadas, encontram-se as NEKs (do inglês, never-in-mitosis-A related kinases). Pelo menos oito proteínas da família NEK têm alguma relação com o centríolo, sendo que NEK2 é residente no centrossomo durante o ciclo celular. Este projeto visa identificar os sítios de interação e de fosforilação de NEK1 e NEK2 no centrossomo humano por meio de espectrometria de massas. Os resultados serão analisados de acordo com a conservação de sequência de aminoácidos e validados em experimentos de co-imunoprecipitação e localização sub-celular. Mutantes fosfomiméticos e fosfodeficientes dos parceiros de interação de NEKs selecionados serão testados com relação a sua função no ciclo celular e na ciliogênese. Em particular, objetiva-se caracterizar os detalhes moleculares das interações de NEK2 com proteínas dos apêndices sub-distais dos centríolos-mãe, mais especificamente ODF2, etapa provavelmente essencial na transição G2/M. Desta forma, nossos dados contribuirão para uma melhor descrição do fenômeno de regulação do ciclo do centríolos por NEK1 e NEK2 em células humanas revelando detalhes moleculares desse mecanismo. (AU)