Análise estrutural e funcional de sequências de DNA com potencial de formação de quadruplex

• Processo: 10/07731-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Paula de Souza
• Beneficiário: Luciana Souto Mofatto
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Metilação de DNA Própolis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: DNA-quadruplex | metilação de DNA | propolis | TMPyP4 | Análise da estrutura do DNA

Resumo

Os G-quadruplexes são sequências ricas em guaninas que formam estruturas altamente organizadas no DNA e RNA através de tétrades ligadas por pontes de hidrogênio. Essas sequências são capazes de modular a transcrição gênica e o splicing alternativo de éxons. Além disso, estudos também mostraram que os quadruplexes estão presentes na região promotora de oncogenes, como c-MYC. A metilação do DNA é uma modificação pós-replicação que freqüentemente aparece na posição 5' da citosina da sequência do dinucleotídeo 5'- citosina guanina - 3' (CpG) em células eucarióticas. O surgimento do DNA metilado está associado à situações patológicas, como inflamação e câncer. A metilação da citosina pode ser responsável pela indução de câncer, causando mutações pontuais em genes supressores de tumor presentes em células somáticas e germinativas. Este trabalho propõe estudar a estrutura e estabilidade de quadruplexes de DNA e sua influência na metilação do DNA. Neste intuito serão feitas análises para verificar se a formação de quadruplex no DNA dupla fita poderá influenciar no padrão de metilação de citosinas, utilizando a sequência com potencial de formação de quadruplex presente no segundo intron do gene PAX9 (rica em G). Será também estudado: (1) o efeito de estabilizadores de quadruplex, como o TMPyP4, no padrão de metilação do DNA em cultura de células; (2) a estabilidade de quadruplexes contendo mais de 4 triades de G; (3) a possível formação de quadruplexes em DNA fita dupla em ensaio "in vitro"; (5) a interação entre extratos de própolis e quadruplexes de DNA. Por último, será realizado um experimento "in silico" sobre a variabilidade da estrutura de quadruplexes no genoma humano.