Obtenção e análise de uma nova biblioteca randômica de X. campestris pv. campestris gerada por Transposoma, na busca por linhagens produtoras de goma com alta viscosidade.

• Processo: 10/01662-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Pedro de Oliva Neto
• Beneficiário: Samuel Matos da Costa
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
• Assunto(s): Mutagênese Viscosidade Xanthomonas campestris Goma xantana
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biblioteca de mutantes | goma xantana | Mutagênese | transposoma Tn5 | viscosidade | Xanthomonas campestris | Biotecnologia de Microrganismos

Resumo

A goma xantana é um heteropolissacarídeo hidrossolúvel, produzido industrialmente pela fermentação da sacarose pela bactéria Xanthomonas campestris. Suas excelentes propriedades reológicas, como o alto grau de viscosidade (mesmo em pequenas concentrações), contribuem para o crescente número de aplicações em Indústrias de Alimentos e de Recuperação Terciária de Petróleo. Muito embora a sequência do genoma dessa bactéria já tenha sido revelada, são inúmeras as tentativas de se gerarem mais informações a respeito do controle gênico da biossíntese desta goma. A Obtenção de microrganismos que produzam polissacarídeos com propriedades funcionais economicamente interessantes (goma com alta viscosidade) tem sido um desafio constante. Com o intuito de se gerar informação a respeito de genes reguladores de sua biossíntese e de se obterem transformantes capazes de produzir goma de alta viscosidade, o presente projeto objetiva gerar uma biblioteca randômica de aproximadamente 2000 mutantes de uma linhagem de Xanthomonas campestris pv. campestris [FCLA B26 amplamente caracterizada quanto ao seu meio de cultura e meio de produção de goma] a partir de sua mutagênese utilizando-se o Transposoma Tn5. Isto será feito, preparando-se células competentes, e posteriormente, realizando-se a Eletroporação do Transposoma. A seleção dos transformantes será realizada, segundo trabalhos da literatura, considerando-se as características morfológicas das colônias como também seu tamanho relativo de halo quando inoculadas em placas de ágar-amido para determinação de alta produção de goma. Em seguida, será realizada a confirmação das melhores viscosidades por meio de análises individuais em Viscosímetro destes clones pré-selecionados. Os valores das viscosidades de caldo de fermentação e de xantana (a 1%), dos mutantes selecionados, serão analisados também em Viscosímetro. Valores de rendimento de produção de goma (Yx/s) e quantidade de biomassa (Yp/s) serão calculados e comparados (por análises estatísticas) entre os mutantes selecionados e sua linhagem original (FCLA B26).