USO DO SISTEMA DE CULTIVO 2D E 3D PARA DIFERENCIAÇÃO DE CÉLULAS-TRONCO ESPERMATOGôNIAIS E INDUÇÃO DA ESPERMATOGÊNESE IN VITRO EM MURINOS

• Processo: 11/02233-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fernanda da Cruz Landim
• Beneficiário: Isadora Arruda
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 10/14930-1 - Uso do sistem de cultivo 2D e 3D para diferenciação de células-tronco espermatogoniais e indução da espermatogênese in vitro em murinos, AP.R
• Assunto(s): Testículo Técnicas in vitro Biotecnologia da reprodução Espermatogênese
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: célula tronco espermatogonial | cultivo in vitro | espermatogênese | Espermatogônia | Sacs | Testículo | Biotecnologia da Reprodução

Resumo

O estudo das células-tronco espermatogoniais (SSC) e, consequentemente da espermatogênese, pode fornecer um modelo melhor para esclarecer a biologia das SC adulta. Além disso, a compreensão dos mecanismos envolvidos no controle funcional das SSC pode proporcionar tratamentos para infertilidade masculina, entendimento sobre a origem e formação de tumores testiculares, conservação de espécies em extinção e melhoramento genético para animais de produção, entre outros temas importantes na mediciana reprodutiva. Os cultivos convencionais tradicionais de células germinativas, como o cultivo em placas de Petri banhados com uma fina camada de gelatina, colágeno, matrigel ou substâncias da matriz extracelular (MEC) ou não, e/ou células somáticas com/sem feeder, não refletem a complexa situação do epitélio seminífero, membrana basal, intraepitelial e compartimento adluminal para o desenvolvimento das SSC, pois não fornece a estrutura espacial presente no ambiente natural (Staub, 2001). Esse fato pode influenciar, negativamente, o desenvolvimento in vitro das SSC, especialmente porque as células meióticas são envolvidas pelas células de Sertoli, assim como os clones interconectados, não possuem contato com a membrana basal ou o compartimento adluminal, na qual o sistema de cultivo 2D convencional não é capaz recriar. No entanto são poucos os trabalhos que comparam diretamente os dois sistemas de cultivo. Desta forma, o objetivo geral deste experimento é estudar a diferenciação celular e a indução da espermatogênese in vitro em células tronco espermatogoniais de camundongos cultivadas em sistemas 2D e 3D. Para tanto será realizado o cultivo in vitro das células germinativas masculinas comparando-se dois sistemas, o cultivo 3D (SACS, Soft Ágar Cultive System) e sistema de cultivo convencional em placas cobertas com gelatina (2D); analisado, em cada um dos sistemas de cultivo, o efeito da adição de gonadotrofinas ao meio; caracterizado, através de imunocitoquimica, as células desenvolvidas durante a espermatogênese in vitro, assimo como as células somáticas co-cultivadas e quantificado, através da coloração de iodeto de propídeo, a carga de DNA nuclear das células cultivadas.