Busca de parceiros de interação com a proteína Nef do HIV-1 através de screening por triplo híbrido em levedura

• Processo: 11/14662-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Luis Lamberti Pinto da Silva
• Beneficiário: Rodrigo Orlandini de Castro
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/50650-6 - Elucidação de mecanismos celulares e moleculares da modulação negativa de proteínas da superfície celular por NEF do HIV-1, AP.JP
• Assunto(s): Lisossomos Endocitose Complexo de Golgi HIV
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Complexo de Golgi | Endocitose | Hiv | Lisossomos | nef | Tráfego de proteínas | Tráfego Intracelular de Proteínas

Resumo

Nef é uma proteína de 27-34 kDa miristilada, codificada pelo genoma dos agentes etiológicos da AIDS em humanos (HIV-1 e HIV-2) e símios (SIV). Nef desempenha papel fundamental em garantir a eficiência da replicação do vírus in vivo e a progressão à forma clínica da AIDS. A importância de Nef nestes aspectos tem sido documentada em modelos animais (revisado em Foster and Garcia, 2008) e através estudos de pacientes assintomáticos infectados com formas do HIV-1 portando mutações no gene Nef (Kirchhoff et al., 1995). A regulação negativa do co-receptor CD4 é a função mais proeminente de Nef, a qual favorece a replicação viral (Michel et al., 2005; Venzke et al., 2006). Além de CD4, Nef altera a localização intracelular de outras proteínas da membrana plasmática com papel importante no sistema imunológico, entre as quais moléculas de MHC-I (Roeth and Collins, 2006). Nef desempenha estas funções interagindo fisicamente com fatores regulatórios do tráfego de proteínas (Roeth and Collins, 2006) e provavelmente facilitando e/ou induzindo o recrutamento de proteínas transmembrana alvo para vetores de transporte específicos (Chaudhuri et al., 2009). Entretanto esses processos são pouco entendidos, particularmente no que diz respeito às etapas que culminam com o direcionamento de proteínas alvo aos lisossomos (daSilva et al., 2009). Estudos em nosso laboratório objetivam elucidar mecanismos envolvidos na atividade desta proteína viral estudando suas ações no tráfego intracelular de proteínas. O presente projeto tem os seguintes objetivos: 1) Identificar clones isolados em um screening baseado no ensaio de triplo híbrido em leveduras, visando a identificação de parceiros de interação com Nef; 2) Confirmar a interação de proteínas identificadas com Nef.