Expressão gênica e potencial de desenvolvimento in vitro dos complexos cumulus-oócitos ovinos tratados com roscovitina

• Processo: 11/14041-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Sony Dimas Bicudo
• Beneficiário: Letícia Ferrari Crocomo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 13/05564-0 - Expressão gênica e alterações epigenéticas durante a inibição meiótica em oócitos de ovelhas, BE.EP.DR
• Assunto(s): RNA mensageiro Ovelhas PIV Embrião
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: embrião | expansão cumulus | maturação nuclear | mRNA | ovelha | Piv | Biotecnologia da reprodução de pequenos ruminantes

Resumo

A maioria dos COCs destinados à produção in vitro de embriões (PIV) ainda não completou seu desenvolvimento e, portanto, não possui adequado estoque de mRNAs e proteínas essenciais para suportar os posteriores estádios do desenvolvimento.Neste contexto, a manutenção temporária do oócito no estádio de vesícula germinativa com uso de inibidores da meiose consiste numa estratégia para incrementar o potencial de desenvolvimento oocitário e embrionário in vitro. Deste modo, esta pesquisa se propõe a avaliar o padrão de expressão dos genes GLUT1, PAP, SOD, Bax, Bcl-2, MATER1, ZAR1 e GDF9, nos oócitos, e HAS2, GREM1, PTX3, PTGS2 e TNFAIP6, nas células do cumulus, considerados fundamentais para aquisição de competência oocitária e funcionalidade das células do cumulus, de complexos cumulus-oócitos (COCs) de ovinos tratados com roscovitina (inibidor específico das quinases dependentes de ciclina); e avaliar o potencial destes COCs em se desenvolver em embriões viáveis após a reversibilidade da ação inibitória da roscovitina. Para isso, folículos com diâmetro entre 2 e 5mm de ovários de ovelhas, obtidos em frigorífico, serão aspirados e COCs grau 1 e 2 serão cultivados, por 20 horas, em meio de maturação padrão (Grupo Controle) acrescido de 75µM de Roscovitina (Grupo Tratamento) a 38,5ºC em 5% de CO2 em ar. Para reversibilidade da ação inibitória da roscovitina e progressão da meiose, os COCs serão cultivados por mais 18horas em meio de maturação livre de inibidores, nas mesmas condições acima descritas. Antes e após 20 e 38 horas de cultivo in vitro, COCs de ambos os grupos experimentais serão avaliados quanto à expansão das células cumulus, em estereomicroscópio, quanto à maturação nuclear, em microscópio de fluorescência, e quanto à expressão gênica no oócito e nas células do cumulus, através qRT-PCR. Parte dos COCs do Grupo Controle e do Grupo Tratamento, após 20 e 38horas de cultivo in vitro, respectivamente, será destinada à fertilização e cultivo embrionário in vitro e os embriões obtidos serão avaliados quanto ao estádio de desenvolvimento e qualidade, em estereomicroscópio, e viabilidade, em microscópio de fluorescência.Palavras-chave: mRNA, maturação oocitária, inibidor da meiose, embrião, ovelha

Publicações científicas

(5)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

LETÍCIA FERRARI CROCOMO; FEDERICA ARIU; LUISA BOGLIOLO; DANIELA BEBBERE; SERGIO LEDDA; SONY DIMAS BICUDO. Roscovitina para o atraso da progressão meiótica em oócitos de ovelhas pré-púberes. Pesquisa Agropecuária Brasileira, v. 55, 2020-09-04. (11/18843-9, 11/14041-5, 13/05564-0)

CROCOMO, LETICIA FERRARI; MARQUES FILHO, WOLFF CAMARGO; ACKERMANN, CAMILA LOUISE; PASCHOAL, DANIELA MARTINS; GUASTALI, MIDYAN DAROZ; DIAS MAZIERO, ROSIARA ROSARIA; SUDANO, MATEUS JOSE; LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA DA CRUZ; BICUDO, SONY DIMAS. Time course of the meiotic arrest in sheep cumulus-oocyte complexes treated with roscovitine. ZYGOTE, v. 24, n. 2, p. 310-318, APR 2016. (11/18843-9, 11/14041-5)

CROCOMO, LETICIA FERRARI; VELA ULIAN, CARLA MARIA; BRANCHINI, NAIANA DA SILVA; DA SILVA, DENISE THEODORO; MARQUES FILHO, WOLFF CAMARGO; LANDIM ALVARENGA, FERNANDA DA CRUZ; BICUDO, SONY DIMAS. Meiotic arrest of sheep oocytes using roscovitine under different medium compositions. Small Ruminant Research, v. 126, p. 52-58, MAY 2015. (11/18843-9, 11/14041-5)

CROCOMO, LETICIA FERRARI; MARQUES FILHO, WOLFF CAMARGO; ACKERMANN, CAMILA LOUISE; DE LIMA, PAULA FERNANDA; BURATINI JUNIOR, JOSE; DA CRUZ LANDIM-ALVARENGA, FERNANDA; BICUDO, SONY DIMAS. Gene expression in sheep cumulus-oocyte complexes meiotically inhibited with roscovitine. Small Ruminant Research, v. 132, p. 115-122, NOV 2015. (11/18843-9, 11/14041-5)

CROCOMO, L. F.; ARIU, F.; BOGLIOLO, L.; BEBBERE, D.; LEDDA, S.; BICUDO, S. D.. In vitro Developmental Competence of Adult Sheep Oocytes Treated with Roscovitine. REPRODUCTION IN DOMESTIC ANIMALS, v. 51, n. 2, p. 276-281, APR 2016. (11/18843-9, 13/05564-0, 11/14041-5)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

CROCOMO, Letícia Ferrari. Expressão gênica e potencial de desenvolvimento in vitro dos complexos cúmulos-oócitos ovinos tratados com roscovitina. 2015. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Botucatu Botucatu.