Clonagem, expressão e purificação de Diguanilato Ciclases Bacterianas para estudos estruturais e desenvolvimento de inibidores

• Processo: 12/10534-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Marcos Vicente de Albuquerque Salles Navarro
• Beneficiário: Everton Edesio Dinis Silva
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/13238-0 - Estudos estruturais e funcionais de proteínas envolvidas em vias de sinalização celular mediadas por c-di-GMP, AP.JP
• Assunto(s): Biologia estrutural Diguanilato cíclico Biofilmes Cristalografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biofilme | c-di-gmp | Cristalografia | Diguanilato ciclases GGDEF | Produção heteróloga de proteínas | Biologia Estrutural

Resumo

As Diguanilato Ciclases (DCG) da família GGDEF são responsáveis pela síntese da molécula mensageira c-di-GMP, somente encontrada em bactérias. Juntamente com fosfodiesterases específicas das famílias EAL e HD-GYP, essas enzimas são responsáveis pelo controle dos níveis intracelulares dessa molécula e consequentemente controlam as vias de sinalização celular mediadas por c-di-GMP. Entre os processos envolvidos podemos destacar a formação de biofilmes, geralmente relacionados à altas concentrações de c-di-GMP. Dados os efeitos deletérios associados à biofilmes bacterianos, tanto na área de saúde como industrial, a busca por moléculas que interfiram nesse processo hoje constitui foco de grande interesse científico. São inúmeras as potenciais aplicações de tais inibidores, incluindo novas terapias contra infecções humanas e em plantas, o desenvolvimento de compostos que permitam um controle espaço-temporal da formação de biofilme em processos de bio-remediação e o desenvolvimento de materiais que previnam a adesão bacteriana em implantes ou cateteres, por exemplo. Nesse sentido, as DGC bacterianas emergem como o principal alvo molecular dado seu papel central no controle dos níveis intra-celulares de c-di-GMP. Esse projeto tem como objetivo principal a clonagem e determinação de protocolos de expressão/purificação de enzimas contendo o domínio GGDEF de diferentes organismos. Mais especificamente, WspR de P. aeruginosa, YdeH de E. coli, XAC2482 e XAC0614 de X. axonopodis. Esse trabalho insere-se dentro de uma proposta mais ampla no nosso grupo de pesquisa, que visa a determinação estrutural de proteínas envolvidas nas vias de c-di-GMP e o desenvolvimento de inibidores específicos de diguanilato ciclases.