Purificação, clonagem, expressão e estudos bioquímicos de alfa 1,3-galactosiltransferase de Trypanosoma cruzi

• Processo: 00/08041-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2000
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia
• Pesquisador responsável: Igor Correia de Almeida
• Beneficiário: Audrie Garcia Piovezam
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Trypanosoma cruzi Doença de Chagas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Alfa-Galactose | Alfa-Galactosiltransferase | Doenca De Chagas | Glicosifosfatidilinositol | T.Cruzi | Tripomastigoto

Resumo

O Trypanossoma cruzi, protozoário causador da doença de Chagas, apresenta como um dos principais componentes da sua membrana plasmática glicoproteínas do tipo mucina, inseridas à membrana via glicosilfosfatidilinositol (GPI). As mucinas são encontradas nos diversos estágios do parasita e participam nos processos de adesão e invasão de células hospedeiras; ativação do sistema imune humoral e celular do hospedeiro; e em mecanismos de escape do parasita. Entretanto, apenas as mucinas de tripomastigotos são reconhecidas por anticorpos líticos anti-alfa-Gal, isolados de pacientes chagásicos, resultando na lise do parasita. Evidências experimentais indicam que os anticorpos anti-a-Gal possam ser os principais responsáveis pelo controle da parasitemia nas fases aguda e crônica da doença de Chagas. Os epitopos de alfa-Gal1,3Gal são expressos em oligossacarídeos O-ligados das mucinas de tripomastigotos, mas não em mucinas de epimastigotos ou de metacíclicos. Esses epitopos são formados pela ação da enzima alfa 1,3- galactosiltransferase (alfa1,3-GalT), ainda não caracterizada em T. cruzi, e cuja atividade está normalmente ausente em humanos. Porém, a função biológica da expressão de alfa-Gal para o parasita ainda não é conhecida. Este projeto apresenta como objetivos principais: a) purificação e caracterização bioquímica da enzima alfal,3-GalT de T. cruzi; b) realização de estudos in vitro com inibidores da enzima; e c) clonagem e expressão da alfa1,3-GalT de T. cruzi. (AU)