Avaliação da produção de citocinas, expressão gênica e análise funcional de células shed expostas ao lta bacteriano

• Processo: 13/09152-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2014
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2015
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
• Pesquisador responsável: Carlos Henrique Ribeiro Camargo
• Beneficiário: Flávia Martins Leal
• Instituição Sede: Instituto de Ciência e Tecnologia (ICT). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José dos Campos. São José dos Campos , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 14/12261-6 - Análise dos efeitos do LTA em cultura celular tridimensional para células da polpa dentária e angiogênese, BE.EP.MS
• Assunto(s): Fosfatase alcalina Citocinas Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: alizarin vermelho | Células SHED | citocinas | expressão gênica | fosfatase alcalina | LTA bacteriano | Endodontia

Resumo

A inflamação da polpa dentária é uma reação do organismo que visa eliminar a causa e permitir o reparo, frente a uma injúria como a infecção bacteriana. O LTA (ácido lipoteicóico), componente da membrana de bactérias Gram-positivas, frequentemente presentes em infecções por cárie do complexo dentino-pulpar e pulpites, estimula a produção e liberação de citocinas, moléculas envolvidas no recrutamento de células inflamatórias e imunológicas, entre elas as interleucinas. Em células-tronco da polpa dentária, a resposta inflamatória frente ao LTA, não está bem caracterizada. Células-tronco da polpa dentária humana são células mesenquimais indiferenciadas do tecido pulpar, que na presença de um dano tecidual, migram para o local da injúria, onde podem se diferenciar e participar do processo de reparo ou regeneração. Os processos celulares e possíveis alterações podem ser avaliados pela expressão gênica e outros ensaios funcionais. O objetivo deste estudo é avaliar o comportamento de células-tronco SHED (Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth) após exposição ao LTA bacteriano, verificando a expressão de citocinas, os efeitos na expressão dos genes DSPP e DMP-1, a alteração na atividade da fosfatase alcalina e da deposição de cálcio pelo ensaio de alizarin vermelho. Serão utilizadas células SHED tratadas com LTA, nas concentrações 1ng/mL, 10ng/mL, 100ng/mL e 1µg/mL de meio de cultura. A expressão dos genes DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) e DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) será avaliada pela técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction). As células serão submetidas a um ensaio enzimático da atividade de fosfatase alcalina (ALP), para observação da ativação de processos de mineralização. Será também analisada qualitativamente pelo ensaio de alizarin vermelho (ARS), a presença de deposição de cálcio pelas células. O teste ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) será realizado para detectar e quantificar as citocinas IL-1ß, IL-6, TNF-±. Os dados obtidos nos ensaios de ALP e ELISA serão submetidos à análise estatística por ANOVA (2 fatores - tempo e tratamento) complementada pelo teste de Tukey (p<0,05).

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

LEAL, Flávia Martins. Avaliação da produção de citocinas, expressão gênica e análise funcional de células SHED expostas ao LTA bacteriano. 2015. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Ciência e Tecnologia. São José dos Campos São José dos Campos.