Análise de células viáveis de Enterococcus faecalis utilizando Propídio Monoazida e PCR em tempo real

• Processo: 13/24063-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2014
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Endodontia
• Pesquisador responsável: Ericka Tavares Pinheiro
• Beneficiário: Viviane Danelon Neves
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Enterococcus faecalis Técnicas in vitro Análise de variância Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR) Reação em cadeia da polimerase em tempo real
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Enterococcus faecalis | Propídio Monoazida | qPCR | Endodontia

Resumo

Os métodos moleculares baseados na detecção de fragmentos de DNA espécie-específicos apresentam inúmeras vantagens sobre os métodos de cultura. Entretanto, uma das suas desvantagens é a não diferenciação entre DNA de células viáveis e mortas. Para minimizar esse problema, um método foi desenvolvido para discriminar bactérias viáveis das mortas utilizando substâncias que se intercalam com o DNA, o corante Propídio Monoazida (PMA), em associação com PCR quantitativo (qPCR). O objetivo desta investigação será padronizar a utilização de PMA, em conjunto com qPCR na detecção e quantificação in vitro do patógeno Enterococcus faecalis. Três concentrações diferentes de PMA (50, 100 e 240 µM) serão adicionadas a suspensões de 106 UFC/mL de células viáveis e mortas de E. faecalis. Após a extração do DNA, qPCR será realizada usando iniciadores específicos para E. faecalis. PMA será testado ainda com misturas contendo diferentes proporções de células viáveis e mortas. A eficácia do PMA em diferenciar células viáveis ou mortas será testada por análise de variância.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

PINHEIRO, ERICKA T.; NEVES, VIVIANE D.; REIS, CAROLINE C.; LONGO, PRISCILA L.; MAYER, MARCIA P. A.. Evaluation of the Propidium Monoazide-quantitative Polymerase Chain Reaction Method for the Detection of Viable Enterococcus faecalis. JOURNAL OF ENDODONTICS, v. 42, n. 7, p. 1089-1092, JUL 2016. (13/24063-1)