Desenvolvimento e validação da técnica espectrometria de massas por monitoramento de reação múltiplo (MRM) para mensurarão dos níveis de citocinas em plasma bovino

• Processo: 14/05405-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2014
• Data de Término da vigência: 09 de junho de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biologia Geral
• Pesquisador responsável: Flávio Vieira Meirelles
• Beneficiário: Pedro Ratto Lisboa Pires
• Supervisor: Gene Louise Wijffels
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: CSIRO Animal, Food and Health Sciences, Austrália
• Vinculado à bolsa: 12/01394-0 - Estudo dos lipídios relacionados aos mecanismos reguladores da pluripotência em células-tronco pluripotentes induzidas (IPS) humanas, BP.DR
• Assunto(s): Espectrometria de massas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cytokines | Espectrometria de massas | multiple reaction monitoring | proteomic | Espectrometria de Massas

Resumo

A inflamação é um processo biológico que usualmente é a principal causa ou consequência de várias doenças e síndromes. Estes processos inflamatórios estimulam a produção e o envolvimento de várias citocinas pró ou anti inflamatórias. A mensuração dos níveis de citocinas se tornou um mecanismo eficiente para detecção e monitoramento destes processos. Devido aos seus baixos níveis plasmáticos (pg/mL), ensaios por imunoabsorção (ELISA) se tornaram estratégias interessantes para a determinação de concentrações de citocinas, porém ainda com algumas limitações. Recentemente, ensaios com base no sistema Luminex aumentou a eficiência da detecção e permitiu a mensuração de mais uma citocina simultaneamente na mesma amostra. No entanto, este sistema ainda é a base de anticorpos e dependente da alta qualidade de anticorpos bem caracterizados e optimizados. Este projeto tem como objetivo desenvolver um método para quantificação de citocinas plasmáticas através do monitoramento múltiplo (MRM) de diferentes moléculas pela espectrometria de massas (MS). A técnica MRM MS é independente de anticorpos e pode ser aplicada a qualquer peptídeo ou proteína de complexos fluidos tal como o plasma sanguíneo. O desafio, como sempre, para detecção de proteínas de baixos níveis em material biológico, é o processamento destas amostras e a sensibilidade do equipamento para assegurar a detecção dos alvos. O benefício deste tipo de abordagem é o número de proteínas detectáveis simultaneamente sem a necessidade de anticorpos e outros reagentes dispendiosos, mantendo alta sensibilidade e seletividade em alta resolução. Outra grande vantagem desta abordagem é possibilidade de ser aplicada para qualquer tipo de material biológico, ocupando grande proporção e valor entre as biotecnias utilizadas atualmente. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MENDOZA-PORRAS, OMAR; PIRES, PEDRO R. L.; GOSWAMI, HARESHWAR; MEIRELLES, FLAVIO V.; COLGRAVE, MICHELLE L.; WIJFFELS, GENE. Cytokines in the grass, a lesson learnt: Measuring cytokines in plasma using multiple reaction monitoring mass spectrometry. RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY, v. 34, n. 9, MAY 15 2020. (14/05405-1)