Estudo do papel de modificações pós-traducionais de proteínas na regulação de splicing em Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 13/22273-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2014
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carla Columbano de Oliveira
• Beneficiário: Maria Griselda Perona
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Processamento de RNA Mapeamento de interação de proteínas Saccharomyces cerevisiae Processamento de proteína pós-traducional
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Interações Proteína-Proteína | Interações RNA-proteína | Modificações pós-traducionais | processamento de RNA | Saccharomyces cerevisae | splicing | Controle da expressão gênica

Resumo

Nos eucariotos, a maioria dos RNAs são transcritos na forma de um pré-RNA que passa por diferentes etapas de processamento até tornar-se maturo e funcional. Um destes processos é denominado splicing, o qual consiste no corte e remoção dos íntrons, seguido pela junção dos éxons adjacentes ao íntron. O processo de splicing é levado a cabo por um complexo nuclear de tamanho da ordem de megadaltons (mDa), o spliceossomo, constituído por RNA, ribonucleoproteínas e aproximadamente noventa proteínas em leveduras. O spliceossomo é uma maquinaria extremamente dinâmica; grandes rearranjos conformacionais, incluindo mudanças estruturais e mudanças na sua composição, possibilitam as duas reações catalíticas de transesterificação. Essas mudanças conformacionais são promovidas em grande parte pelas RNA helicases da família DExD/H-box, as quais são reguladas pela interação com outras proteínas do spliceossomo, ou por modificações pós-traducionais.Entre as diferentes modificações pós-traducionais que podem regular as funções protéicas, a ubiquitinação tem grande relevância, comprovada a partir da observação de que vários fatores do spliceossomo são regulados por ubiquitinação reversível, sendo alvo para novos estudos que tentam elucidar os mecanismos de controle do processo. A proteína Cwc24p foi isolada junto com proteínas componentes do NTC (Nineteen Complex) em Saccharomyces cerevisiae, e posteriormente suas interações com Prp19p e Brr2p foram confirmadas in vitro.Prp19p é a proteína que dá nome ao complexo NTC e Brr2p é uma helicase da família DExD/H-box que interage com o complexo U5 snRNP. Estas interações sugerem que Cwc24p pode ter um papel central na ativação do spliceossomo. O objetivo central deste trabalho é o de caracterizar o papel molecular de Cwc24p como fator geral de splicing, analisando como as modificações reversíveis por ubiquitinação regulam as atividades desta proteína dentro do spliceossomo. (AU)