Produção de mutante da enzima arginase recombinante de Leishmania (Leishmania) amazonensis para estudo de cristalização

• Processo: 14/10521-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2014
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Edson Roberto da Silva
• Beneficiário: Caroline Comanini Augusto
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Assunto(s): Leishmania Mutação Inibidores enzimáticos Arginase Tripanotiona Cristalização Cristalografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: arginase | Cristalização | Cristalografia | inibidores | leishmania | mutação | Inibidores enzimaticos

Resumo

A enzima arginase em Leishmania desempenha papel fundamental na síntese de poliaminas. A arginase converte L-arginina em L-ornitina e uréia. A L-ornitina gera putrescina após sofrer descarboxilação pela enzima ornitina descarboxilase (ODC). A putrescina é utilizada como substrato na síntese de poliaminas como espermidina e espermina. A espermidina é substrato da enzima tripanotiona sintetase que condensa este composto com glutationa gerando a tripanotiona. A tripanotiona é utilizada pela enzima tripanotiona redutase na redução de ROS (reactive oxygen species) produzida na mitocôndria do parasita e pelos macrófagos do hospedeiro. A tripanotiona também é utilizada na neutralização de radicais livres nitrogenados como o NO (óxido nítrico). Descrevemos recentemente a inibição da arginase de Leishmania (Leishmania) amazonensis por compostos naturais como flavonoides, flavanoides e antocianidinas. Estes compostos bloqueiam a arginase por diversos tipos de mecanismo inibição: competitiva, incompetitiva, não-competitiva e mista. A visualização da interação destas moléculas através de estudos de cristalografia poderá fornecer dados para o planejamento racional de inibidores seletivos da arginase a partir de um protótipo natural. Para isto propomos neste projeto a construção de mutantes da enzima arginase de L. (L.) amazonensis com o objetivo de estabilizar a enzima para estudos de cristalização com os inibidores naturais.