Investigação da expressão celular de chaperonas moleculares e de sua função por complementação em leveduras 'nocaute'

• Processo: 15/08909-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2015
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Carlos Henrique Inacio Ramos
• Beneficiário: Fernando Diez García
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/50161-8 - Estudo da estrutura e função da chaperona Hsp90 com ênfase no seu papel em homeostase celular, AP.TEM
• Assunto(s): Proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: chaperona molecular | Enovelamento de proteínas | Estabilidade de proteinas | Heat shock protein | Proteínas

Resumo

O projeto de pesquisa temático tem como objetivos principais a caracterização da estrutura e função do sistema chaperona Hsp90/Hsp70 (chaperonas e suas co-chaperonas) através da purificação de proteínas heterólogas de diversos organismos, principalmente humano, cana de açúcar e Leishmania. Um grande esforço na caracterização da função destas proteínas tem sido feito através da implementação de testes em células para validar e ampliar o conhecimento obtido através dos estudos funcionais realizados in vitro. Neste sentido estamos tendo sucesso com a investigação da complementação de diversas chaperonas em linhagens de levedura nocaute de determinados genes. No momento estamos estudando a complementação em leveduras nocautes dos genes da hsp104 (complementação com genes de chaperonas humana e de cana de açúcar) e da co-chaperona p23 (complementação com genes de chaperonas humana e de Leishmania). O estudo passa por etapas de verificação de fenótipo(s) (normalmente resistência a estresses do tipo térmico ou químico), verificação de expressão, verificação de expressão das chaperonas da levedura e eventualmente construção de mutantes para aprofundar o estudo (já temos alguns construtos de gene humano e estamos inciando seus estudos). Futuramente, em colaboração com o bolsista PD especialista em espectrometria de massas tentaremos investigar os efeitos no proteoma. Idealmente, seria interessante que o candidato pudesse também realizar experimentos de qRT-PCR para otimizar a validação de efeitos. Espera-se que os resultados encontrados possam não apenas providenciar informação sobre as interações entre as chaperonas e entre estas e outras proteínas mas também que novos alvos de estudo possam ser identificados.