Produção de embriões de truta arco-íris (Oncorhynchus mykiss) em células germinativas depletadas pelo knockout do gene dead end

• Processo: 15/24148-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 28 de janeiro de 2016
• Data de Término da vigência: 27 de maio de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Recursos Pesqueiros e Engenharia de Pesca - Recursos Pesqueiros de Águas Interiores
• Pesquisador responsável: Rafael Henrique Nóbrega
• Beneficiário: Melanie Digmayer
• Supervisor: Goro Yoshizaki
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Tokyo University of Marine Science and Technology (TUMSAT), Japão
• Vinculado à bolsa: 13/20450-0 - Marcadores moleculares e criopreservação de espermatogônias tronco de carpa comum, Cyprinus carpio e zebrafish, Danio rerio, BP.PD
• Assunto(s): Aquicultura Truta-arco-íris Oncorhynchus mykiss Células germinativas Sistemas CRISPR-Cas CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: dead end gene | depletion | germ cell-less | Primordial Germ Cell | Biologia da reprodução

Resumo

O sistema de "agrupados de curtas repetições palindrômicas regularmente interespaçadas" (CRISPR) associado a Cas é um método simples e eficiente para edição do genoma alvo. Devido à facilidade de produção de RNA alvo, o sistema CRISPR/Cas9 é uma ferramenta promissora para a engenharia genômica nas diversas áreas incluindo a aquicultura. Valiosos estoques substitutos de peixes têm sido alcançados por transplantes alogênicos e xenogênicos de células germinativas. Proles de truta provenientes de salmão são obtidas quando as células germinativas primordiais (PGC) de truta são injetadas em receptores recém-eclodidos de salmão. Entretanto, a eficiência desta técnica é baixa devido à competição entre as PGC endógenas e do doador para os nichos livres. O uso de células germinativas depletadas como receptores é uma alternativa para o aumento da eficiência do transplante. O gene dead end (dnd) é expresso especificamente nas PGCs e tem se mostrado essencial para a migração, manutenção e sobrevivência destas durante a embriogênese. O objetivo nesse projeto é gerar células de truta depletadas em dnd como receptoras, através do sistema CRISPR/Cas9. (AU)