Avaliação, in vitro, da influência de soluções de higiene sobre a viabilidade celular de microrganismos que compõem o biofilme de próteses totais

• Processo: 16/16934-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2017
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Cláudia Helena Lovato da Silva
• Beneficiário: Camila Borba de Araujo
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Prótese total Sobrevivência celular Biofilmes Placa bacteriana Agentes de controle de micro-organismos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Agentes de controle de microrganismos | biofilme | Prótese Total | viabilidade celular | Prótese Total (Reabilitação Oral)

Resumo

O objetivo do estudo será avaliar, in vitro, o efeito de soluções higienizadoras (Triclosan, Cloramina T, R. communis a 10% e 2% e Hipoclorito de sódio a 0,25%) sobre a viabilidade celular, por microscopia de epifluorescência, de microrganismos presentes no biofilme de próteses totais. Inicialmente, será determinada a concentração inibitória mínima (CIM) das soluções de Triclosan e Cloranima T pelo método de micro diluições em placas de cultura celular com 96 poços, em duplicata. A variável será testada para oito microrganismos sendo: C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, S. mutans, S. aureus, E. coli, P. aeruginosa e E. faecalis. Como fator de variação será considerado o meio de imersão (solução) em 5 níveis: GHS= solução de hipoclorito de sódio 0,25%; GT= solução de Triclosan; GCt= solução de Cloramina T; GRc10: solução de R. communis a 10%; GRc2: solução de R. communis a 2%. Grupos controle (n=6) serão formados para comprovar a formação do biofilme e para comprovar a esterilização com corpos de prova (n=6). Biofilmes serão formados sobre espécimes circulares (13mm de diâmetro x 4mm de espessura) de resina acrílica termicamente ativada e estes serão imersos nas soluções por 20 minutos, enxaguados com PBS e imersos em meio de cultura líquido (Letheen) para processamento. Para análise da viabilidade celular dos biofilmes após exposição às soluções será empregado o microscópio de epifluorescência. O procedimento experimental resumir-se-á na diluição das soluções do kit Live/Dead® BacLight" a 0,3%, segundo as indicações do fabricante. Em seguida, os corpos de prova (n=3) com o biofilme exposto aos protocolos de higiene serão transferidos a uma nova placa de 24 poços contendo 4 mL de PBS, pH 7, em cada poço. Serão aplicados 300 ¼L da solução do componente A do kit (0,3%) + 300 ¼L da solução do componente B (0,3%) sobre a superfície do corpo de prova e este será incubado, protegido da luz a temperatura ambiente durante 15 minutos. O corante será escoado e o corpo de prova será observado em microscópio de epifluorescência com filtros apropriados. A leitura será baseada na determinação da viabilidade dos microrganismos a partir da diferença de integridade da membrana das células incorporadas, onde os microrganismos vivos com as membranas intactas e microrganismos mortos com membrana danificada apresentam diferença na fluorescência. As análises serão realizadas em triplicada. Os dados obtidos serão submetidos as análises de normalidade (Teste de Shapiro-Wilkis) e homocedasticidade (Teste de Levene) para definição do teste estatístico pertinente. As análises serão conduzidas a um nível de significância de 5%. (AU)