Atividade de RNF113A na eficiência e fidelidade da reação de splicing

• Processo: 16/17963-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Pesquisa
• Data de Início da vigência: 02 de janeiro de 2017
• Data de Término da vigência: 01 de fevereiro de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Patricia Pereira Coltri
• Beneficiário: Patricia Pereira Coltri
• Pesquisador Anfitrião: Melissa Jurica
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of California, Santa Cruz (UC Santa Cruz), Estados Unidos
• Assunto(s): Processamento de RNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: processamento de RNA | spliceossomo | Biologia Moleculat

Resumo

O splicing é um processo essencial para controle da expressão gênica. Os pre-RNAs são compostos por seqüências intermediárias, denominadas introns, e por seqüências presentes no RNA maduro, os exons. O splicing consiste na remoção dos introns e ligação dos exons e ocorre no spliceossomo. Este complexo de cerca de 2 MDa é composto por 5 snRNAs (small nuclear RNAs) e mais de 100 proteínas. A montagem e atividade deste complexo dependem de rearranjos na interação entre os RNAs e destes com as proteínas, entre as quais está RNF113A. Resultados obtidos por nosso grupo mostraram que RNF113A imunoprecipita os snRNAs U4, U5 e U6, além das proteínas PRP19 e BRR2, posicionando-a no núcleo catalítico do spliceossomo. A ausência de RNF113A reduz o nível do snRNA U5 associado a este complexo e aumenta o nível de snRNA U1, o que pode indicar que esta proteína é importante para os rearranjos e ativação do complexo. Além disso, a adição de RNF113A recombinante à reação de splicing in vitro levou à inibição da reação, possivelmente devido a um efeito "dominante negativo". Embora seja importante para os rearranjos necessários para a ativação do spliceossomo, a atuação desta proteína na reação de splicing in vitro é pouco explorada. Neste projeto, pretende-se analisar a eficiência do splicing em reações com e sem esta proteína, utilizando-se pre-RNAs com pequenas alterações nos sítios de splicing. Em conjunto, os experimentos propostos contribuirão para elucidar a função de RNF113A no spliceossomo de mamíferos.