Análise funcional de genes polimórficos envolvidos com a melanogênese em melanoma cutâneo

• Processo: 16/02193-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2018
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Gustavo Jacob Lourenço
• Beneficiário: Gustavo Jacob Lourenço
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Carmen Silvia Passos Lima ; Manoela Marques Ortega
• Assunto(s): Oncologia Polimorfismo gênico Melanoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Adcy3 | Creb1 | melanoma cutâneo | Mitf | Polimorfismo gênico | Cancerologia

Resumo

Nós identificamos, recentemente e pela primeira vez, 12.882 novos polimorfismos gênicos de base única (SNPs) associados ao risco do melanoma cutâneo (MC), por meio da genotipagem em larga escala com microarranjos de DNA (SNP array 6.0, Affytmetrix®), em 103 portadores do tumor e 103 controles. Três novos SNPs localizados em regiões regulatórias do processamento do RNA mensageiro (splicing) de genes relacionados com a melanogênese, ADCY3 c.675+9196T>G (rs11900505), CREB1 c.303+373G>A (rs10932201) e MITF c.938-325A>G (rs7623610), foram considerados de maior interesse entre eles. As quantidades e as funções das proteínas codificadas pelos alelos selvagens e variantes dos SNPs não foram ainda determinadas. Frente ao exposto, os objetivos do presente estudo são os de verificar se os genótipos dos referidos SNPs influenciam: 1) o risco de ocorrência do MC, os aspectos clínicos e as características do tumor; 2) a sobrevida livre de progressão e a sobrevida global dos pacientes com MC; 3) as expressões dos genes e das proteínas ADCY3, CREB1 e MITF (via da melanogênese), e SF1 e HNRNPA1 (mecanismo de splicing), e; 4) a eficácia do mecanismo de splicing dos genes ADCY3, CREB1 e MITF. Para atingir os referidos objetivos, o DNA genômico do sangue periférico de 250 pacientes com MC e 250 controles será analisado para identificar os genótipos de cada SNP por meio da PCR, com ensaios TaqMan®. As expressões dos genes e das proteínas serão avaliadas em RNA e proteínas totais de amostras de sangue periférico de controles (15 com o genótipo homozigoto selvagem, 15 heterozigotos e 15 homozigotos variantes de cada SNP) por meio da PCR quantitativa, com iniciadores específicos e o corante SYBR green, e do método de western blotting, respectivamente. A eficácia do mecanismo de splicing será analisada por meio do ensaio do minigene repórter em linhagem celular de melanoma (A-375). A significância estatística das diferenças entre os grupos será calculada por meio dos testes de Fisher ou qui-quadrado e pela regressão logística múltipla. Os tempos de sobrevida serão avaliados pelo método de Kaplan-Meier e por análises uni e multivariada de Cox. Os resultados das diferenças de expressão gênica serão avaliados por meio dos testes t e ANOVA ou Mann-Whitney e Kruskal-Wallis. A eficiência do mecanismo de splicing será avaliada por meio da análise dos tamanhos dos fragmentos gerados pelos distintos minigenes. Acreditamos que nossos resultados contribuirão para definir os papéis dos SNPs na produção das proteínas e de seus papéis na predisposição herdada ao MC. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CARRON, JULIANA; TORRICELLI, CAROLINE; SILVA, JANET KELLER; COSER, LILIAN DE OLIVEIRA; PASSOS LIMA, CARMEN SILVIA; LOURENCO, GUSTAVO JACOB. Intronic variants of MITF (rs7623610) and CREB1 (rs10932201) genes may enhance splicing efficiency in human melanoma cell line. MUTATION RESEARCH-FUNDAMENTAL AND MOLECULAR MECHANISMS OF MUTAGENESIS, v. 823, JUL-DEC 2021. (16/02193-9)

LOURENCO, GUSTAVO JACOB; OLIVEIRA, CRISTIANE; CARVALHO, BENILTON SA; TORRICELLI, CAROLINE; SILVA, JANET KELLER; BOAS GOMEZ, GABRIELA VILAS; RINCK-JUNIOR, JOSE AUGUSTO; OLIVEIRA, WESLEY LIMA; VAZQUEZ, VINICIUS LIMA; SERRANO, SERGIO VICENTE; et al. Inherited variations in human pigmentation-related genes modulate cutaneous melanoma risk and clinicopathological features in Brazilian population. SCIENTIFIC REPORTS, v. 10, n. 1, JUL 22 2020. (16/02193-9, 12/15880-3, 12/16617-4)