Comparação da atividade de expressão de promotores sintéticos em cromossomos e plasmídeos

• Processo: 17/04938-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de agosto de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rafael Silva Rocha
• Beneficiário: Ananda Sanches Medeiros
• Supervisor: Victor de Lorenzo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), Espanha
• Vinculado à bolsa: 15/22386-3 - Construção e caracterização de promotores constitutivos mutantes e de promotores controlados pelos reguladores globais CRP e Fis em Escherichia coli, BP.IC
• Assunto(s): Biologia sintética Plasmídeos Expressão gênica Fatores de transcrição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacterial chromosome | genic expression | mutant cell | plasmids | Synthetic Biology | transcription factors | Biologia Sintética

Resumo

O estudo da lógica da expressão gênica em bactérias luz da Biologia Sintética é muito dependente do uso de linhagens bacterianas mutantes para fatores de transcrição específicos de forma a facilitar a caracterização de cada componente do circuito isoladamente. Além disso, a análise de atividade promotora feita in vivo é normalmente feita através de genes repórteres fluorescentes (como o GFP) inseridos em plasmídeos. Entretanto, esses sistemas podem causar variações celulares, seja por diferença de número de plasmídeos por célula ou por sobrecarga do metabolismo celular, que podem influenciar na análise da expressão gênica. Nós já caracterizamos a ausência de efeitos pleiotrópicos na expressão gênica de GFP regulada por Promotores Constitutivos Sintéticos inserida por plasmídeos de baixo número de cópias em bactérias mutantes para Fatores de Transcrição Globais (CRP, IHF e Fis). Nesse projeto, propõe-se a implementação de um sistema repórter mono cópia estável para integração no cromossomo a fim de se caracterizar a atividade promotora em Escherichia coli. Será testado também novos promotores sintéticos regulados por CRP e Fis de uma biblioteca de promotores em mono cópia usando a integração cromossomal. Esses sistemas de inserção serão feitos usando-se Transposons Vectors, amplamente descritos pelo Environmental Microbiology Laboratory, onde esse projeto será desenvolvido. O sistema desenvolvido no projeto proporcionará uma nova metodologia que será implementada posteriormente em Ribeirão Preto com um importante impacto em projetos do grupo. (AU)