Ensaios de modularidade do sistema de autoindução da expressão gênica construído em Bacillus subtilis

• Processo: 18/00507-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2018
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Danielle Biscaro Pedrolli
• Beneficiário: Victor Nunes de Jesus
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 14/17564-7 - Reprogramação do metabolismo de purina em Bacillus subtilis através de tecnologia de sRNA, AP.JP
• Assunto(s): Biologia sintética Bacillus subtilis Regulação da expressão gênica Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacillus subtilis | Purina | Regulação da expressão gênica | Riboswitches | Biologia sintética

Resumo

Nas etapas anteriores deste projeto, foi construído com sucesso um sistema de autoindução da expressão gênica em B. subtilis. O sistema promove a indução da expressão gênica durante a fase exponencial de crescimento bacteriano, com início quando densidade óptica (600nm) da cultura atinge valores entre 0,6 a 0,8. O pico de indução é atingido quando densidade óptica da cultura atinge valores entre 3,2 e 3,4. A próxima etapa do trabalho é a construção de variações do sistema para verificação da modularidade do mesmo. Há casos relatados na literatura de alteração do padrão de expressão gênica influenciado pelas sequencias adjacentes (Nielsen et al., 2016). Essa modularidade será testada através de dois caminhos. No primeiro, o operon repórter da luciferase será substituído pelo gene da GFP. Assim, será possível verificar se o gene a ser controlado interfere no funcionamento do sistema. A seguir, o sistema será clonado em dois locus distintos no cromossomo, um locus para o sistema luxRI (sistema indutor), outro locus para o gene repórter controlado pelo promotor responsivo aos sitema de autoindução. Assim, alteraremos um sistema construído em cis, para um em trans. Com esta construção, determinaremos, ao mesmo tempo, a influência do contexto genético e da distância entre os componentes no sistema de autoindução. Idealmente, o sistema deverá se mostrar altamente modular, funcionando independente da configuração dos seus componentes. (AU)