Estudo da influência da atmosfera gasosa sobre a expressão de genes reguladores de modificações epigenéticas em fibroblastos bovinos

• Processo: 18/04638-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2018
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fabiana Fernandes Bressan
• Beneficiário: Jessica Brunhara Cruz
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Assunto(s): Epigênese genética Cultura de células Expressão gênica Células somáticas Fibroblastos Atmosfera Bovinos Técnicas in vitro
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bovino | Células somáticas | modificações epigenéticas | tensão de oxigênio | Epigenética

Resumo

Os cultivos in vitro necessitam da simulação de um ambiente que torne favorável seu desenvolvimento. Dentre os componentes do ambiente artificial, a atmosfera gasosa é de suma importância, onde variações, principalmente nas concentrações de oxigênio (O2), podem interferir e alterar o epigenoma celular. As alterações epigenéticas sofrem influência da concentração de O2, uma vez que desmetilases, enzimas responsáveis por remover radicais metil do DNA e de histonas, fazem parte da família de proteínas dependente de Fe2 e O2 para a catálise, o que pode influenciar no padrão de controle de expressão gênica. Dessa forma, torna-se de extrema importância entender os mecanismos biológicos envolvidos nessa regulação gênica de células somática cultivadas in vitro, pois como já observado em alguns estudos, a reprogramação epigenética das células doadoras de núcleo ainda é um obstáculo em técnicas como a transferência nuclear de células somática (TNCS) e geração de células tronco pluripotente induzidas (IPSCs). Baseado nisso, a hipótese deste projeto é que diferentes concentrações de oxigênio durante o cultivo celular in vitro alteram a transcrição de genes envolvidos na regulação de marcas epigenéticas em fibroblastos bovinos. Dessa forma, o objetivo geral é analisar genes moduladores do epigenoma em fibroblastos bovinos submetidos a diferentes concentrações de O2 durante o cultivo celular. Para isso, fibroblastos bovinos serão cultivados em baixa (5%) e alta (20%) tensão de O2 em diferentes passagens. Ao final de cada período de cultivo, as amostras serão coletadas para posterior extração de RNA e análise de genes reguladores de metilação de DNA e modificação de histonas. Assim, pretendemos estudar o efeito da concentração de O2 sobre expressão gênica de enzimas reguladoras epigenéticas em fibroblastos bovino e, com isso, auxiliar no desenvolvimento de metodologias mais eficientes para os cultivos in vitro de células doadoras de núcleo destinadas a reprogramação nuclear.