Identificação, produção recombinante e caracterização de cisteíno peptidases do inseto Diaphorina citri, vetor da Doença dos Citros Huanglongbing

• Processo: 19/09652-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2019
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Adriana Karaoglanovic Carmona
• Beneficiário: Patricia da Silva Lima
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Enzimologia Escherichia coli Catepsinas Inibidores enzimáticos Greening (doença de planta) Diaphorina citri
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: catepsinas | cistatinas | Diaphorina citri | Expressão recombinante | Huanglongbing | inibidores | Enzimologia

Resumo

O Huanglongbing (HLB), uma das principais doenças dos citros, é causado por bacterias Gram-negativas do gênero Candidatus Liberibacter. Os principais sintomas do HLB nas plantas são o amarelamento dos ramos, clorose das folhas e danos aos frutos, que se tornam assimétricos, pequenos, com sementes abortadas e sabor amargo. Na Ásia e Américas, a propagação da doença ocorre por transmissão do patógeno através do vetor psilídeo Diaphorina citri Kuwayama, sendo o melhor modo de controle a prevenção. O combate ao D. citri é feito com inseticidas, normalmente nocivos ao meio ambiente e a saúde humana, e por esse motivo tem-se pesquisado formas de controle biológico e por biotecnologia. A busca por alvos moleculares é interessante, sendo as catepsinas enzimas promissoras por possuírem uma variedade de atuações nos seres vivos. Nos insetos, as catepsinas da classe das cisteíno peptidases, além de serem enzimas digestivas, atuam na metamorfose, ativação da apoptose, sistema imune, entre outros. A caracterização destas enzimas em D. citri e a busca por seus inibidores poderá levar, no futuro, à produção de plantas transgênicas superexpressando inibidores capazes de retardar o desenvolvimento e proliferação do inseto. Além disso, poderão ser desenvolvidas técnicas de silenciamento gênico destas enzimas. No presente projeto propomos a identificação, produção recombinante em E. coli e caracterização de catepsinas de Diaphorina citri (L-like e B-like), assim como ensaios de inibição enzimática utilizando inibidores sintéticos e cistatinas de citros, visando a validação dessas enzimas como possíveis alvos para controle do inseto. (AU)