Mapeamento dos elementos regulatórios da transcrição de MLKL

• Processo: 19/13813-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 25 de outubro de 2019
• Data de Término da vigência: 24 de outubro de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ricardo Weinlich
• Beneficiário: Larissa Cardoso Zanetti
• Supervisor: Richard Sherwood
• Instituição Sede: Instituto Israelita de Ensino e Pesquisa Albert Einstein (IIEPAE). Sociedade Beneficente Israelita Brasileira Albert Einstein (SBIBAE). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Brigham and Women's Hospital (BWH), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 17/25009-1 - Modulação gênica de RIPK3 e MLKL e seu impacto na sensibilidade à morte por necroptose, BP.DD
• Assunto(s): Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Necroptose Morte celular Transcrição genética Fatores de transcrição CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Crispr | gene editing | Gene regulation | Mlkl | Necroptosis | regulatory elements | Regulação transcricional

Resumo

Necroptose é uma via de morte celular independente de caspase que apresenta características morfológicas de necrose acidental. Pode ser ativado por diferentes estímulos, que culminam na ativação da MLKL, a molécula efetora dessa via. A importância da necroptose tem sido demonstrada em muitas condições fisiopatológicas, incluindo infecções bacterianas e virais, câncer, insultos isquêmicos e doenças autoimunes. Em muitos desses ambientes, o nível de expressão de MLKL variou significativamente, impactando na sensibilidade à morte celular. No entanto, existem atualmente dados muito limitados sobre a regulação transcricional da MLKL. Nosso objetivo é elucidar os elementos regulatórios transcricionais da expressão do gene MLKL, caracterizando potenciadores, fatores de transcrição e outros mecanismos envolvidos na sua regulação. Usando um ensaio regulador de edição múltiplo, pretendemos realizar uma triagem mediada por CRISPR-Cas9 de alta escala acerca de 10kb do genoma cis-regulatório próximo ao gene MLKL e usar a expressão GFP knock-in como uma leitura mais fácil da atividade do gene MLKL. Combinado com nossos resultados anteriores que identificaram uma região promotora mínima responsável pela ativação basal e por interferon gama, este projeto visa revelar alguns novos elementos regulatórios de MLKL que ainda não foram descritos. Esse conhecimento contribuirá para entender como MLKL é regulado e ajudará a estabelecer a base para explorar a manipulação da expressão de MLKL em diferentes fisiopatologias. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

VELIMIROVIC, MINJA; ZANETTI, LARISSA C.; SHEN, MAX W.; FIFE, JAMES D.; LIN, LIN; CHA, MINSUN; AKINCI, ERSIN; BARNUM, DANIELLE; YU, TIAN; SHERWOOD, RICHARD I.. Peptide fusion improves prime editing efficiency. NATURE COMMUNICATIONS, v. 13, n. 1, p. 8-pg., 2022-06-18. (17/25009-1, 19/13813-6)