Expressão de miRNAs por astrócitos cronicamente expostos a espécies reativas de oxigênio e submetidos à hipóxia aguda

• Processo: 20/00110-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2020
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2021
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Marimélia Aparecida Porcionatto
• Beneficiário: Natália Rodrigues Courbassier
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neurobiologia Biologia celular Hipóxia Astrócitos Fatores de crescimento do endotélio vascular MicroRNAs Imuno-histoquímica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: astrócitos | hipóxia | miRNA | Neurobiologia

Resumo

O Fator Induzido por Hipóxia (HIF) é um fator de transcrição responsivo à hipóxia, ativado quando há desequilíbrio entre o suprimento e a demanda tecidual de oxigênio (O2). Em astrócitos reativos, o aumento da expressão de HIF-1± está associado à tolerância isquêmica, ou pré-condicionamento, um evento capaz de gerar resistência à ocorrência de isquemia mais grave, diminuindo assim a extensão da lesão. Dados da literatura sugerem que o HIF-1± seja capaz de induzir o pré-condicionamento pela da produção de efetores neuroprotetores ou moléculas como eritropoietina (EPO) e Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF). Observou-se que nos astrócitos reativos a expressão do HIF-1± é dependente de receptores P2X7, canal iônico controlado por ATP, cuja expressão também se encontra aumentada, permitindo a indução de tolerância isquêmica. O VEGF, em astrócitos, estimula a proliferação por intermédio de endotelinas, que atuam em receptores astrocitários estimulando a proliferação pela indução de ciclinas da fase G1 do ciclo celular. Outra alteração na expressão gênica observada em astrócitos expostos à hipóxia consiste na ativação da via de sinalização de Notch, sendo o aumento da expressão de Notch-1 visualizada principalmente em astrócitos que expressam GFAP. Em se tratando de expressão gênica, os microRNAs (miRNAs) são importantes moduladores pós transcricionais, podendo inibir a tradução ou aumentar a degradação do mRNA pela ligação à região 3' não-traduzida (3'UTR). Tendo em vista o exposto, o presente estudo busca compreender a resposta à hipóxia por astrócitos do camundongo mutante Nox3eqlb, uma linhagem que apresenta uma mutação pontual no gene Nox3, que codifica para NADPH oxidase 3 (NOX3), com aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO). Nossa hipótese é que os camundongos Nox3eqlb apresentem tolerância isquêmica pela exposição crônica a ERO. O objetivo deste projeto é avaliar se os astrócitos Nox3eqlb, que são cronicamente expostos à maior quantidade de H2O2, apresentam alterações na expressão de miRNAs relacionados com proteção contra isquemia aguda. Para alcançar este objetivo, utilizaremos cultura primária de astrócitos isolados de camundongos selvagem (BALB/c) e mutante (Nox3eqlb). Analisaremos a expressão de HIF-1± e GFAP por imunocitoquímica, quantificaremos a proliferação dos astrócitos in vitro e a expressão de miRNAs relacionados com proteção à isquemia e com a via de sinalização por Notch, em astrócitos submetidos ou não à hipóxia. Esperamos com este projeto verificar se a exposição crônica a ERO afeta a resposta astrocitária celular e molecular à hipóxia, em especial com relação ao pré-condicionamento promotor de resistência à isquemia.