Geração de linhagens de L. braziliensis nocautes (KO) para IP6K, TERT e IP6K+TERT utilizando a abordagem CRISPR-Cas9

• Processo: 20/16481-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2021
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Marcelo Santos da Silva
• Beneficiário: Vitor Luiz da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/10753-2 - Investigação do papel dos pirofosfatos de inositol (PP-IPs) em vias de reparo de DNA e dinâmica dos telômeros utilizando tripanossomatídeos como modelo, AP.JP
• Assunto(s): Biologia celular Leishmania Recombinação homóloga Reparo do DNA Telomerase Telômero CRISPR-Cas9
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: CRISPR-Cas9 | Inositol pirofosfatos | leishmania | Recombinação Homóloga | reparo de DNA | telômeros | Biologia Celular e Molecular de tripanosomatídeos

Resumo

Em eucariotos modelo, pirofosfatos de inositol (PP-IPs) - principalmente IP7 e IP8 - estão envolvidos em uma ampla gama de processos celulares, como regulação do comprimento dos telômeros e recombinação homóloga (HR). No entanto, as proteínas-alvo dos PP-IPs, assim como seu mecanismo de ação, ainda não estão bem estabelecidas. Os principais PP-IPs envolvidos nesses processos são PP-IP4, IP7 e IP8, que são sintetizados por vias envolvendo a participação das quinases IP6K e PP-IP5K. Parasitos tripanossomatídeos não possuem genes ortólogos para PP-IP5K, ou seja, não sintetizam IP8, o que os torna excelentes modelos para o estudo de PP-IP4 e IP7. Assim, este plano de pesquisa consiste em gerar linhagens de L. braziliensis KO para IP6K (IP6K-/-), telomerase (TERT-/-) e double-KO (IP6K-/- + TERT-/-), o que facilitará a investigação subsequente do papel de PP-IP4 e IP7 nas vias de reparo de DNA e homeostase dos telômeros. Estas linhagens de L. braziliensis serão essenciais para responder a questões fundamentais levantadas pelo projeto principal.