Titulação de baculovírus recombinante

• Processo: 21/05158-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2021
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biologia Geral
• Pesquisador responsável: Soraia Attie Calil Jorge
• Beneficiário: Juliana Pierin Jorge Macaubas
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/05264-0 - Estabelecimento de plataforma de resposta rápida à produção de VLPs do SARS-CoV-2, AP.R
• Assunto(s): Baculoviridae Virologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: baculovirus | Células Sf9ET | Partículas Semelhantes a Vírus- VLP | SARS CoV-2 | Titulação | Virologia

Resumo

As células Sf9 e Hi-5 serão infectadas com 4 Baculovírus recombinantes obtido por transfecçãocelular (L1) em Frascos do tipo Schott. Diferentes MOIs serão testados. No dia anterior à infecção, aviabilidade celular será determinada pelo método de exclusão com azul de Trypan e serão inoculadas ~4,6 x 105 células/mL. As células receberão no dia seguinte volumes variáveis de baculovírusrecombinante. As células serão então amostradas em diferentes tempos após a infecção para ensaios detitulação.A titulação dos vírus recombinantes será realizada utilizando as células Sf-9 ET (Easy titration),conforme descrito por Hopkins e Esposito, 2009. Esta linhagem possui o gene da proteína verdefluorescente (GFP) sob a ação do promotor de poliedrina do baculovírus, de forma que célulasinfectadas fiquem fluorescentes. A titulação será realizada em placas de 96 poços, com 7,5 x 104célulaspor poço, em um volume de trabalho de 100 uL. Será feita uma diluição seriada da suspensão viral de10-1a 10-8, sendo utilizadas as diluições de 10-3a 10-8, em triplicatas. A placa será incubada e analisadaapós três dias em microscópio de fluorescência, para verificar a formação de focos de célulasadjacentes que apresentem fluorescência. O cálculo para estabelecer o título viral será feito com base naTCID50, calculada baseado em Reed-Muench.