Superexpressão da lipoproteína de L. interrogans LIC13259 em diferentes cepas avirulentas de Leptospira e avaliação de sua aptidão de crescimento em DMCs e propriedades imunoprotetoras em camundongos

• Processo: 21/09160-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 13 de dezembro de 2021
• Data de Término da vigência: 12 de junho de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: Maria Fernanda Cavenague Pereira
• Supervisor: Melissa J. Caimano
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Connecticut (UCONN), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 18/08131-0 - Expressão heteróloga do gene LIC13259 na cepa saprófita Leptospira biflexa e aquisição da capacidade de evasão do sistema imune humano, BP.DR
• Assunto(s): Superexpressão gênica Leptospira Leptospira interrogans Interações hospedeiro-patógeno
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Imunoproteção | Leptospira | superexpressão | Interação patógeno-hospedeiro

Resumo

A leptospirose é uma doença infecciosa causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. Diferentes espécies de mamíferos, principalmente roedores, agem como portadores assintomáticos, liberando grande número de leptospiras na urina. Os humanos são hospedeiros acidentais e adquirem as espiroquetas pelo contato direto ou indireto com a urina contaminada desses animais. A disponibilidade das sequências do genoma completo para diferentes Leptospira spp. permitiu a identificação de proteínas putativas expostas à superfície, potencialmente envolvidas na patogênese bacteriana. Recentemente, descrevemos a proteína de leptospira LIC13259 como uma lipoproteína de superfície que contribui para adesão, colonização e evasão imune, interagindo com componentes do hospedeiro, como laminina, plasminogênio, vitronectina e a complementa os componentes C7, C8 e C9 e inibe o complexo de ataque à membrana (MAC). Nos últimos anos, ferramentas moleculares para manipulação genética de Leptospira spp. expandiram-se consideravelmente, ajudando a compreender as funções de várias proteínas de leptospira. A expressão da proteína heteróloga na esirpe saprófita L. biflexa está evoluindo como uma abordagem útil para validar a atividade biológica da leptospira. Esta espécie de Leptospira saprófita tem sido empregada como modelo para manipulação genética e análise de ganho de função. Analisamos a abordagem de ganho de função fundindo geneticamente o gene lic13259 com três promotores diferentes para superexpressar LIC13259 em L. biflexa sorovar Patoc. No entanto, várias dificuldades foram encontradas durante a expressão da proteína heteróloga e a translocação para a superfície de L. biflexa. Portanto, neste projeto, tiraremos vantagem de duas cepas mutantes LPS atenuadas de L. interogans sorovar Manilae disponíveis no laboratório do Dr. Caimano. As cepas M895 e M1352, que expressam um LPS defeituoso, serão utilizadas para superexpressar LIC13259 e validar sua função e localização subcelular. Atualmente, os hamsters sírios dourados são o modelo animal mais comumente usado para teste de virulência de isolados e culturas de Leptospira, investigar aspectos da patogênese, triar cepas mutantes para virulência e avaliar vacinas candidatas. A cepa de camundongos C3H / HeJ é uma cepa tlr4 - / - KO que é mais suscetível à infecção por leptospira do que sua cepa original do tipo selvagem. Colaboradores da UConn Health desenvolveram um modelo de camundongos C3H / HeJ para colonização crônica por leptospira em que os animais são infectados de forma consistente e eliminam um grande número de leptospiras na urina (até 108 / ml) por um longo período de tempo. Assim, outro objetivo principal deste projeto é estabelecer o modelo de infecção de camundongos C3H / HeJ como um modelo para avaliação da eficácia da vacina, onde o principal resultado esperado será a prevenção da eliminação da leptospirose na urina após a vacinação. (AU)