Expressão e localização celular das proteínas CRK 1 e 3 em Trypanosoma cruzi

• Processo: 22/03343-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2022
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Simone Guedes Calderano
• Beneficiário: Evelin Mariani Gonçalves
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/01013-5 - CRKs (Cdc2 Related Kinases) em Trypanosoma cruzi: desvendando seu papel na proliferação, metaciclogênese e no crosstalk entre proliferação e metabolismo celular, AP.R
• Assunto(s): Ciclo celular Expressão de proteínas Genética reversa Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cdc2 related kinase | ciclo celular | Trypanosoma cruzi | Biologia Celular e Molecular

Resumo

Neste projeto serão analisadas a expressão proteica das enzimas CRK 1 e CRK3 ao longo do ciclo celular e nas diferentes fases do ciclo de vida de Trypanosoma cruzi (cepa Dm28c). Além disso será avaliada a localização celular por meio de ensaio de imunofluorescência nas diferentes formas de vida de T. cruzi. Para tanto será utilizada a técnica de genética reversa CRISPR/Cas9 a fim de adicionar sequencias de epitopos tag na porção 5' dos genes das enzimas CRK1 e CRK3. Desta forma estas enzimas serão expressas conjugadas ao epítopo tag na sua porção N terminal. Estas modificações permitirão o estudo das enzimas utilizando anticorpos comerciais contra o epítopo tag específico (Myc, TY ou HÁ) nos ensaios de western blotting e imunofluorescência. (AU)