Efeito de biópsias sequenciais com agulha TRU-CUT na expressão gênica testicular

• Processo: 21/11898-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2022
• Data de Término da vigência: 14 de maio de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: João Carlos Pinheiro Ferreira
• Beneficiário: Paula Zanin Rattes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Espermatogênese Expressão gênica Estresse térmico Testículo Biópsia Modelos lineares
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: espermatogênese | expressão gênica | Testículo | Reprodução Animal

Resumo

Os efeitos do estresse térmico (ET) sobre a expressão gênica testicular vêm despertando cada vez mais interesse.Contudo, para a obtenção de amostras de testiculares, quase sempre é necessária a castração dos machos, que ao impossibilitando assim colheitas de amostras, limita o entendimento dos fenômenos estudados. Biópsias testiculares utilizando agulhas do tipo Punch, Split e Tru-cut vêm sendo utilizadas para a obtenção de amostras do tecido testicular com objetivo diagnóstico de infertilidade ou subfertilidade. Esse procedimento também é usado em estudos fisiológicos e fisiopatológicos testiculares. Contudo, pouco se sabe sobre as consequências das colheita quando realizadas de forma seriada, visto que são potencialmente nocivas à integridade tecidual e desencadeadoras de inflamação, eventos conhecidamente deletérios a fisiologia testicular e a espermatogênese. Como o objetivo de investigar os efeitos da realização de biópsias testiculares sequenciais com agulha TRU-CUT na expressão gênica testicular, oito cordeiros mestiços (Dorper x Santa Inês), com idade de ~18 meses serão acomodados em baias, com livre acesso ao cocho e bebedouro, com dieta dimensionada para mantença. Após o período de adaptação (15 dias), serão realizadas colheitas de biópsias testiculares sequenciais empregando-se agulha TRU-CUT 16 G nos seguintes momentos 0 (momento da primeira colheita), 6, 9, 24 e 45 horas, alternando o testiculo a cada colheita. As amostras serão armazenadas em criotubos e mantidas a -80ºC até uso posterior. Por RT-PCR será investigada a abundância relativa de transcritos de mRNA de alguns early genes (EgR1, Jun, Fos) e de genes que comprovadamente tem sua expressão alterada durante episódios inflamatórios (PLA2 e COX) ou de ET (StAR, HSF1, Hsp70, GPX1, BAX, BCL2, P53). Os resultados serão avaliados empregando-se o teste de Shapiro Wilk e Leven. Para a comparação da abundância relativa de mRNA dos genes, será aplicado um modelo linear misto com medidas repetidas no tempo em que o momento, local da biópsia, assim como a sua interação, serão estabelecidos como efeitos fixos (PROC MIXED).