Contribuição do Wound Healing Assay na validação de colírios biológicos como produtos de terapia avançada para doença do olho seco

• Processo: 22/07884-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina
• Pesquisador responsável: Mônica de Cássia Alves
• Beneficiário: Carolina Alves Carnetta
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/04045-5 - Avaliação de novas técnicas de terapia celular em doenças de superfície ocular, AP.JP2
• Assunto(s): Células-tronco mesenquimais Oftalmologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: células-tronco mesenquimais | meio condicionado | Síndrome do olho seco | Oftalmologia

Resumo

A obtenção do meio de cultura condicionado (MC) da cultura de células-tronco se dá a coleta do secretoma dascélulas durante o processo de cultura celular, sendo um meio com fatores de crescimento, citocinas e moléculassinalizadoras livres e vesículas extracelulares, que progressivamente se tornam relevante, tanto para diagnósticocomo para terapêutica. Neste campo, identificamos a Síndrome do Olho Seco (SOS) que impacta profundamente aqualidade de vida das pessoas. O Laboratório de Biologia Celular tem desenvolvido como produto para essespacientes o autocolírio de soro de sangue, porém existem pacientes com impossibilidade de acesso venoso, ou comsorologias reagentes para doenças infecciosas que são impedidos de utilizar o produto. Diante disto, o projeto tempor objetivo produzir soro alogênico ABO de tipagem sanguínea compatível e não compatível com doador de célulatronco límbica e MC a partir do cultivo de células-tronco obtidas de cordão umbilical (CTMcup), célula-tronco detecido adiposo (CTMTA) e célula-tronco límbica (CTL) com intuito de se obter o secretoma das células paraavaliação terapêutica na SOS. As célulastronco serão cultivadas em meio DMEM aditivado e com 10% de soro fetalbovino para caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo com marcadores específicos. As células serãocultivadas até que atinjam 70% de confluência, momento em que sofrerão wash out, uma etapa de lavagem para aretirada do soro fetal bovino (SFB) e receberão o meio DMEM aditivado xeno free por 48 horas. Após esse período,o secretoma será coletado, centrifugado e armazenado. As CTL serão cultivadas em placas de poços para oprocedimento da técnica wound healing (WH) com cada colírio biológico produzido. A primeira coluna equivale aocontrole e a segunda e terceira coluna, as células sofrerão estresse osmótico para a simulação da SOS com meiohiperosmolar (MH) (420 mOsm/L) por 48 horas. Posteriormente, será realizada a técnica WH, fazendo uma lesãonos três poços que receberão diferentes condicionamentos. A primeira coluna receberá o meio de cultura padrão,segunda coluna somente MH e a terceira receberá 50% MH e 50% colírio biológico. Os poços serão observados atéo fechamento da ferida e o resultado analisado com uso do software livre ImageJ com cálculo das áreas