Análise do transcriptoma do núcleo intersticial da estria terminal (BNST) de camundongos submetidos ao teste de reinstalação da busca de etanol induzida pelo estresse de exposição ao rato

• Processo: 22/09953-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2022
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Neuropsicofarmacologia
• Pesquisador responsável: Fabio Cardoso Cruz
• Beneficiário: Ben Tagami Rodolpho
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 18/15505-4 - Estudo neurobiológico da recaída ao uso de cocaína e crack: identificação de plasticidades em neuronal ensembles que armazenam memórias relacionadas com a adição de drogas, AP.JP2
• Bolsa(s) vinculada(s): 23/17928-8 - Análise da função da proteína hevin na plasticidade de hubs dopaminérgicos da amidala induzida pelo etanol, BE.EP.MS
• Assunto(s): Etanol Transcriptoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Estresse de Exposição ao Rato | Etanol | neuronal ensembles | Transcriptoma | Dependência de Substância de Abuso

Resumo

A dependência de etanol é um transtorno multifatorial, influenciada por variantes biopsicossociais. Nesse contexto, a exposição a situações estressantes durante a abstinência pode aumentar a vulnerabilidade do indivíduo a recair ao uso dessa substância mesmo após longos períodos de abstinência. Embora a relevância, a neurobiologia da interação entre o estresse e a recaída ao uso de etanol ainda não está totalmente esclarecida, porem estudos apontam a participação da amídala estendida nessa interação. Dessa forma, o objetivo do presente estudo é avaliar se a exposição de camundongos ao teste de exposição ao rato é capaz de promover a reinstalação da busca de etanol. Para isso, camundongos machos serão isolados em gaiolas moradia, tendo acesso a uma garrafa contendo etanol 9% + sacarose 2% ou sacarose 2%, por 4 horas, durante 7 dias. Posteriormente será realizado o treino para aquisição da autoadministração operante em que os animais receberão reforços em esquema magazine (1 pellet de açúcar a cada 30 segundos, durante 30 minutos) durante 3 dias. Em seguida serão submetidos a três sessões em esquema de razão fixa 1 (RF1) de reforços, onde um nosepoke é reforçado com 1 pellet de açúcar, seguido por três sessões em esquema RF3. O treino será concluído com quinze sessões nas quais os animais receberão reforços de etanol 9% + sacarose 2% ou sacarose 2% em esquema de RF3. Na próxima etapa os animais passarão pela extinção do comportamento de autoadministração. Serão realizadas no mínimo 4 sessões em que as respostas no nosepoke ativo não serão reforçadas. Finalmente, será realizado o teste de reinstalação da busca de etanol induzida pelo estresse, em que os animais serão submetidos ao protocolo de exposição ao rato, em seguida à serão colocados nas caixas de autoadministração para uma sessão de 30 minutos em esquema RF3. No primeiro experimento, sessenta minutos após o teste de reinstalação os animais serão perfundidos e os encéfalos serão coletados para a análise de imunofluorescência para as proteínas Fos, CamkII, GAD67 e NeuN, no núcleo intersticial da estria terminal (BNST), visando caracterizar os neuronal ensembles presentes nessa estrutura. No segundo experimento, imediatamente após o teste de reinstalação, os encéfalos serão coletados e posteriormente processados para a realização da análise do transcriptoma do BNST para analisar a expressão gênica geral dessa região. No terceiro experimento, após o teste de reinstalação, os encéfalos serão coletados e processados para a análise da expressão gênica de genes de interesse apenas em neuronal ensembles da BNST, por meio da citometria de fluxo para células ativadas seguida de RT-PCR.